Współkultura 3D z bezpośrednią interakcją: współhodowla komórek rakowych z monocytami w celu zbadania ich interakcji
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:48 min. • April 30th, 2023
Na początek dodaj DQ collagen IV, substrat białkowy hartowany barwnikiem fluorescencyjnym do ekstraktu z macierzy zewnątrzkomórkowej lub ECME. Wlej ten ekstrakt do każdej studzienki szkiełka dwudołkowego. Pierwszą studnię należy oznaczyć jako kokulturę, a drugą jako kontrolę. Dodaj odpowiednią ilość fluorescencyjnie znakowanej zawiesiny komórek rakowych do studzienek i inkubuj szkiełko w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez pożądany czas, aby promować przyczepienie komórek.
Dodać wymaganą ilość zawiesiny komórek monocytów do pierwszego dołka. Niech ECME zestala się w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Wlej równe proporcje pożywki do hodowli komórek rakowych i monocytów do każdej studzienki i inkubuj szkiełko w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez żądany czas w środowisku dwutlenku węgla. W studni kohodowlanej komórki rakowe wydzielają białka, takie jak białko chemoatraktantu monocytów, aby przyciągnąć monocyty.
W przeciwieństwie do tego, monocyty wytwarzają metaloproteinazę macierzy lub MMP, aby degradować kolagen, sprzyjając inwazji komórek rakowych. Obserwuj szkiełko pod mikroskopem konfokalnym. Degradacja kolagenu DQ emituje fluorescencję, którą można zaobserwować bardziej w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych