JoVE Encyclopedia of Experiments
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:45 min • April 30th, 2023
Wstrzyknięcie doprzewodowe to technika dostarczania mieszaniny iniekcyjnej, która może zawierać komórki rakowe, wektory ekspresyjne lub środek terapeutyczny uzupełniony barwnikiem znacznikowym do przewodów gruczołu sutkowego.
W tym celu należy naładować strzykawkę mieszanką do wstrzykiwań. Następnie połóż znieczuloną mysz brzuszną stroną do góry na łóżku chirurgicznym. Wykonaj nacięcie na skórze między pachwinową lub piątą parą gruczołów sutkowych. Ostrożnie oddziel płat skóry od otrzewnej ciemieniowej, aby uwidocznić drzewo przewodowe.
Za pomocą kleszczy podnieś smoczek i ostrożnie odetnij jego zewnętrzną część, aby view otwór kanału. Za pomocą pęsety unieść krawędź płatka skóry i delikatnie wprowadzić igłę strzykawki do brodawki sutkowej, aby podać mieszankę do wstrzykiwań. Monitoruj ruch barwnika znacznikowego do drzewa przewodowego sutka. Barwnik rozprowadza się w drzewie przewodowym bez przeciekania do zrębu, co wskazuje na udane wstrzyknięcie.
Odczekać kilka sekund, aby uniknąć rozlania, a następnie powoli wyjąć igłę z miejsca wstrzyknięcia. Zamknij nacięcie klipsem do rany. W poniższym protokole wykonamy wstrzyknięcie doprzewodowe w celu dostarczenia adenowirusa z ekspresją Cre do mysiego gruczołu sutkowego.
Stosuj techniki aseptyczne podczas całego zabiegu chirurgicznego. Wykonaj nacięcie na skórze na długości około jednego centymetra między dwoma czwartymi pachwinowymi gruczołami sutkowymi. Ostrożnie oddziel płat skóry od otrzewnej ciemieniowej, aby uwidocznić drzewo przewodowe sutka.
Ostrożnie przytrzymaj sutek kleszczami zegarmistrzowskimi, aby usunąć zewnętrzny sutek bez przecinania pobliskiej skóry za pomocą nożyczek do mikropreparacji. Załaduj około trzech do pięciu mikrolitrów mieszaniny iniekcyjnej adenowirusa Cre do 25-mikrolitrowej strzykawki Hamiltona z przymocowaną metalową igłą w piaście o rozmiarze 33.
Oszacować objętość mieszaniny do wstrzykiwań w strzykawce na podstawie niebieskiego barwnika zawartego w mieszaninie. Delikatnie przytrzymaj krawędź płata skóry delikatną zakrzywioną pęsetą i powoli wstrzyknij mieszaninę do wstrzykiwań adenowirusa Cre do brodawki sutkowej, monitorując rozprzestrzenianie się niebieskiego barwnika na drzewie przewodowym sutka. Utrzymuj szybkość wstrzykiwania tak wolno, jak to możliwe, aby uniknąć uszkodzenia światła kanałowego.
O udanym wstrzyknięciu wewnątrzprzewodowym świadczy to, że wstrzyknięte płyny rozchodzą się po całym drzewie przewodowym bez przeciekania do komory zrębu. Delikatnie wyjąć igłę z brodawki, aby uniknąć wycieku wstrzykniętego płynu. Zbadaj dystalną stronę gruczołu sutkowego lub okolicę wstrzykniętego sutka.
Dyfuzja barwnika do pobliskiego zrębu, jak pokazano tutaj, wskazuje na wstrzyknięcie poduszeczki tłuszczowej do sutka, a nie na udane wstrzyknięcie doprzewodowe. Zamknij rany chirurgiczne i skórę klipsami do ran.
Wyjmij mysz ze znieczulenia i umieść ją na poduszce grzewczej w czystej klatce w celu odzyskania sprawności. Monitoruj rozwój guza sutka zgodnie z opisem w protokole tekstowym.