Analiza inwazyjności zPDX: badanie inwazyjnego zachowania przerzutowych komórek rakowych w ksenoprzeszczepach zarodków danio pręgowanego

Ksenoprzeszczepy zarodków danio pręgowanego są przydatne w badaniu inwazji komórek rakowych. Przygotowanie modeli ksenoprzeszczepów poprzez wstrzyknięcie znakowanych fluorescencyjnie przerzutowych komórek nowotworowych i komórek nienowotworowych do przestrzeni okołowodorowej dwóch transgenicznych zarodków. Przestrzeń perywitelinowa to przestrzeń między perydermą zarodka a woreczkiem żółtkowym. Pozwól zarodkom rosnąć przez pożądany okres.

W tym okresie przerzutowe komórki rakowe dzielą się agresywnie w miejscu wstrzyknięcia, podczas gdy komórki nienowotworowe pozostają stabilne. Po inkubacji użyj pipety Pasteura, aby przenieść zarodki do naczynia do zawiesiny ze szklanym dnem. Usuń nadmiar wody z jaj i umieść zarodki w żądanej pozycji do obrazowania. Trzymaj szkiełko nakrywkowe na wierzchu naczynia i umieść naczynie pod mikroskopem jasnego pola.

Przechwytuj obrazy i analizuj inwazyjne zachowanie obu typów komórek. Przerzutowe komórki rakowe mają tendencję do atakowania naczyń krwionośnych z miejsca wstrzyknięcia. Poruszają się wzdłuż krążenia, a następnie wnikają w otaczającą tkankę, aby się namnażać. Natomiast komórki nienowotworowe pozostają w miejscu wstrzyknięcia. W przykładowym protokole wstrzykniemy komórki raka piersi do przestrzeni okołozębnej i przewodu Cuviera w modelach ksenoprzeszczepów danio pręgowanego w celu zbadania przerzutów.

Aby uwidocznić przerzuty, za pomocą pipety Pasteura przenieś wstrzyknięty zarodek danio pręgowanego do naczynia z polistyrenu o szklanym dnie i usuń nadmiar wody z jaj. Wyobraź sobie całe ciało zarodka za pomocą mikroskopu konfokalnego ustawionego na małe powiększenie, aby uzyskać ogólny wzór rozprzestrzeniania się komórek nowotworowych.

Użyj lasera o długości 488 nanometrów, aby uwidocznić unaczynienie zarodka danio pręgowanego i lasera o długości 543 nanometrów, aby uwidocznić wszczepione komórki nowotworowe oznaczone czerwonym markerem fluorescencyjnym. Następnie zeskanuj zarodek w ośmiu do dziesięciu krokach, aby uzyskać obraz wysokiej jakości.

• Zebrafish Embryo Xenografts - A research tool used to study cancer cell invasion.
• Perivitelline Space - A niche between the zebrafish embryo periderm and the yolk sac.
• Metastatic Cancer Cells - Malignant cells that can spread aggressively and invade lots areas .
• Non-cancerous Cells - Stable cells that do not invade or proliferate like cancer cells.
• Invasiveness - The capacity of cancer cells to infiltrate healthy tissues.

• Define the concept of Zebrafish Embryo Xenografts - These are used for studying cancer invasion (e.g., invasiveness).
• Outline the Perivitelline Space - It serves as the injection site for xenografts (e.g., perivitelline space zebrafish).
• Describe Metastatic Cancer Cells and their aggressive division and invasion traits.
• Connect to Experiment - The injected metastatic and non-cancerous cells in embryos facilitate the investigation of cellular behaviors.

• What is Zebrafish Embryo Xenografts and how it aids in studying cell invasiveness?
• What is the role of Perivitelline Space in these xenograft models?
• What difference in behavior can be expected between Metastatic Cancer Cells and Non-cancerous Cells?

• Practical Applications - Xenografts help in understanding cancer cell behaviors (e.g., invasiveness).
• Industry Impact - Such studies can guide developments in healthcare and cancer research.
• Societal Importance - Findings may result in better cancer treatments (e.g., combating malignancy).
• Scientific Advances -The methodology aids in real-time tracking of cell actions.