JoVE Encyclopedia of Experiments
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:25 min • April 30th, 2023
Ksenoprzeszczepy zarodków danio pręgowanego są przydatne w badaniu inwazji komórek rakowych. Przygotowanie modeli ksenoprzeszczepów poprzez wstrzyknięcie znakowanych fluorescencyjnie przerzutowych komórek nowotworowych i komórek nienowotworowych do przestrzeni okołowodorowej dwóch transgenicznych zarodków. Przestrzeń perywitelinowa to przestrzeń między perydermą zarodka a woreczkiem żółtkowym. Pozwól zarodkom rosnąć przez pożądany okres.
W tym okresie przerzutowe komórki rakowe dzielą się agresywnie w miejscu wstrzyknięcia, podczas gdy komórki nienowotworowe pozostają stabilne. Po inkubacji użyj pipety Pasteura, aby przenieść zarodki do naczynia do zawiesiny ze szklanym dnem. Usuń nadmiar wody z jaj i umieść zarodki w żądanej pozycji do obrazowania. Trzymaj szkiełko nakrywkowe na wierzchu naczynia i umieść naczynie pod mikroskopem jasnego pola.
Przechwytuj obrazy i analizuj inwazyjne zachowanie obu typów komórek. Przerzutowe komórki rakowe mają tendencję do atakowania naczyń krwionośnych z miejsca wstrzyknięcia. Poruszają się wzdłuż krążenia, a następnie wnikają w otaczającą tkankę, aby się namnażać. Natomiast komórki nienowotworowe pozostają w miejscu wstrzyknięcia. W przykładowym protokole wstrzykniemy komórki raka piersi do przestrzeni okołozębnej i przewodu Cuviera w modelach ksenoprzeszczepów danio pręgowanego w celu zbadania przerzutów.
Aby uwidocznić przerzuty, za pomocą pipety Pasteura przenieś wstrzyknięty zarodek danio pręgowanego do naczynia z polistyrenu o szklanym dnie i usuń nadmiar wody z jaj. Wyobraź sobie całe ciało zarodka za pomocą mikroskopu konfokalnego ustawionego na małe powiększenie, aby uzyskać ogólny wzór rozprzestrzeniania się komórek nowotworowych.
Użyj lasera o długości 488 nanometrów, aby uwidocznić unaczynienie zarodka danio pręgowanego i lasera o długości 543 nanometrów, aby uwidocznić wszczepione komórki nowotworowe oznaczone czerwonym markerem fluorescencyjnym. Następnie zeskanuj zarodek w ośmiu do dziesięciu krokach, aby uzyskać obraz wysokiej jakości.