Name: Ortotopowy przeszczep kończyn tylnych u szczurów (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Poznaj ortotopowy przeszczep kończyn tylnych u szczurów z wykorzystaniem techniki mankietowej do rewaskularyzacji. Ta metoda pozwala badać urazy niedokrwienne oraz odpowiedzi immunologiczne przy odrzucaniu przeszczepu.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Operacja dawcy i pobranie kończyny tylnej
<ol>
<li>Do procedury operacyjnej wykorzystuje się sterylny zestaw narzędzi mikrochirurgicznych. Chirurg powinien mieć na sobie odpowiednią odzież, w tym sterylne rękawiczki, które należy zmienić przed rozpoczęciem zabiegu chirurgicznego.</li>
<li>Szczura poddaje się znieczuleniu poprzez domięśniowy zastrzyk pentobarbitalu (50mg/kg IP) i umieszcza w pozycji grzbietowej na podgrzewanym polu operacyjnym, co zapewnia stabilną temperaturę ciała zwierzęcia przez cały czas trwania zabiegu.</li>
<li>Przed nacięciem skóry pole operacyjne odkaża się trzykrotnie, stosując zarówno środek dezynfekcyjny, jak i alkohol. Aby zapobiec wysychaniu rogówek zwierzęcia, przed operacją oczy smaruje się maścią okulistyczną (Vidisic).</li>
<li>Wykonuje się nacięcie skóry w obrębie prawej pachwiny, mniej więcej na poziomie więzadła pachwinowego. Naczynia udowe zostają wypreparowane za pomocą kauteryzacji bipolarnej i rozcięcia tępym narzędziem; głębokie gałęzie podwiązuje się nicią jedwabną 8-0.</li>
<li>W celu przeciwzakrzepowego działania przez żyłę prątną wstrzykuje się 300μl (50 IU) heparyny.</li>
<li>Naczynia udowe podwiązuje się na poziomie więzadła pachwinowego i przecina dystalnie względem podwiązania.</li>
<li>Kończynę tylną płucze się lodowatym (4°C) roztworem HTK (5ml) poprzez tętnicę udową w ciągu 5 minut.</li>
<li>Wszystkie grupy mięśniowe rozcina się ostro nożyczkami i wykonuje osteotomię za pomocą obrotowej piły elektrycznej na poziomie dystalnej części uda.</li>
<li>Pobraną kończynę zanurza się następnie w 20mL lodowatego roztworu HTK w celu konserwacji i przechowywania w niskiej temperaturze do czasu transplantacji.</li>
</ol>
Operacja i transplantacja biorcy
<ol>
<li>Szczur zostaje poddany znieczuleniu poprzez doszpikowe wstrzyknięcie pentobarbitalu i ułożony na plecach w polu operacyjnym.</li>
<li>Wykonuje się nacięcie skóry w obrębie prawej pachwiny, mniej więcej na poziomie więzadła pachwinowego. Naczynia udowe zostają wypreparowane za pomocą kauteryzacji bipolarnej i tępej dyssekcji.</li>
<li>Naczynia udowe zostają podwiązane tak dystalnie, jak to możliwe, lecz proksymalnie w stosunku do odejścia naczyń nadłonowych. Zaciski naczyniowe zostają umieszczone na poziomie więzadła pachwinowego na tętnicy i żyle.</li>
<li>Polietylenową mankietkę nasuwa się na tętnicę (średnica wewnętrzna mankietki: 0,912 mm, grubość ścianki mankietki: 0,010 mm, długość mankietki: 2,0 mm) oraz żyłę (średnica wewnętrzna mankietki: 1,151 mm, grubość ścianki mankietki: 0,010 mm, długość mankietki: 2,0 mm). Następnie krawędź światła naczynia zostaje wyciągnięta za pomocą rozszerzacza naczyniowego, a tętnica i żyła udowa zostają wywinięte na całej długości mankietki (około 2 mm) i utrwalone okrężną ligaturą jedwabną 8-0.</li>
<li>Aby zrobić miejsce dla kończyny dawcy, kończynę biorcy usuwa się poprzez ostrą dyssekcję grup mięśniowych, a osteotomię wykonuje się w połowie kości udowej.</li>
<li>Kończynę dawcy wyjmuje się z roztworu HTK, a transplantację rozpoczyna się od osteosyntezy kości udowej, używając igły 18G (długość: 1,5-2,0 cm) jako gwoździa śródszpikowego.</li>
<li>Brzuszne grupy mięśniowe zostają ściśle zbliżone za pomocą przerwanych szwów z nici Vicryl lub Prolene 4-0.</li>
<li>Anastomozy naczyniowe wykonuje się poprzez nasunięcie żyły i tętnicy dawcy na kompleks żyły i mankietki biorcy. Ponownie wykonuje się okrężną ligaturę jedwabną 8-0 w celu zabezpieczenia anastomozy.</li>
<li>Zdejmuje się zacisk żylny, a następnie tętniczy; reperfuzję stwierdza się poprzez powrót kolorytu dystalnej części kończyny i stopy, a także tętniący przepływ w tętnicy.</li>
<li>Pozostałe grzbietowe grupy mięśniowe zostają ponownie zbliżone za pomocą przerwanych szwów z nici Vicryl lub Prolene 4-0.</li>
<li>Skórę zamyka się przerwanymi szwami z nici Vicryl lub Prolene 4-0.</li>
<li>Szczura biorcę umieszcza się na podgrzewaczce i monitoruje ściśle aż do wybudzenia.</li>
<li>Zwierzęta biorcze otrzymują profilaktycznie antybiotyki (Cefazolina, 20 mg/dobę, IM) oraz Buprenex (0,1 mg/kg, SC) przez trzy dni po transplantacji.</li>
</ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Nie zgłoszono konfliktów interesów.

Dziesięciolecia badań eksperymentalnych poprzedzały i umożliwiły pomyślne przeszczepy dłoni u ludzi w niedawnym czasie. W 1978 roku Shapiro i współpracownicy opracowali model ortotopowego przeszczepu kończyny tylnej u szczurów, który dobrze nadaje się do badania różnych aspektów patologicznych, fizjologicznych i immunologicznych, a także efektów funkcjonalnych przeszczepów złożonych tkanek. Zmodyfikowaliśmy najtrudniejszą część procedury, mianowicie anastomozę naczyniową, wprowadzając technikę mankietową bezszwowa. W por...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparyna Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Roztwór Custodiol HTK</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nożyczki do osłonki</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Kleszczyki rozszerzające</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Rurki polimidowe</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

ortotopowe przeszczepianie kończyny tylnej u szczurów

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Allotransplantacja złożonych tkanek (CTA) stanowi obecnie właściwą opcję terapeutyczną po utracie dłoni, przedramienia lub palców i stała się nową jednostką terapeutyczną w chirurgii rekonstrukcyjnej. Jednakże, aby zapewnić przeżycie przeszczepu, wymagana jest długotrwała, wysokodawkowa, wielolekowa terapia immunosupresyjna, która niesie ze sobą ryzyko poważnych skutków ubocznych, co ogranicza szersze zastosowanie tej metody. Dalszy postęp w tej dziedzinie może zależeć od lepszego zrozumienia podstaw immunologii oraz uszkodzeń reperfuzyjnych po niedokrwieniu w przeszczepach złożonych tkanek.
Do tej pory ortotopowa transplantacja kończyny tylnej u szczurów była preferowanym modelem gryzoni w badaniach nad transplantacją rekonstrukcyjną (RT), jednak jest to procedura niezwykle wymagająca, która wiąże się z koniecznością posiadania nadzwyczajnych umiejętności mikrochirurgicznych w celu ponownego połączenia naczyń krwionośnych, kości, mięśni i nerwów.
Wprowadziliśmy technikę anastomozy z wykorzystaniem mankietu naczyniowego do tego modelu, zapewniając szybkie i niezawodne podejście do transplantacji kończyny tylnej szczura. Technika ta upraszcza i skraca procedurę chirurgiczną oraz umożliwia chirurgom z podstawowym doświadczeniem w mikrochirurgii pomyślne przeprowadzenie operacji przy wysokim wskaźniku przeżywalności i niskiej częstości występowania powikłań. Technika ta wydaje się być odpowiednia zarówno do badań immunologicznych, jak i badań nad uszkodzeniem reperfuzyjnym (IRI).

W niniejszej pracy opisujemy procedurę ortotopowego przeszczepienia kończyny tylnej szczura, która wydaje się być złotym standardem modelu in vivo w badaniach nad allotransplantacją tkanek złożonych.

Ortotopowe przeszczepianie kończyny tylnej u szczurów

Allotransplantacja złożonych tkanek (CTA) stanowi obecnie uznaną opcję terapeutyczną po utracie dłoni, przedramienia lub palców i stała się nowatorską...

Jestem Robert Suha z Laboratorium Badawczego Daniela Roski w Katedrze Transplantologii Trzewnej i Chirurgii Klatki Piersiowej na Uniwersytecie Medycznym Innsbrook. Dzisiaj zaprezentujemy procedurę transplantacji kończyny u szczura, wprowadzając technikę mankietową w celu rewaskularyzacji. Operacja transplantacji kończyny jest wykonywana przez naszych rezydentów chirurgii, w tym przeze mnie.Wykorzystujemy ten model zwierzęcy do badania obrażeń związanych z niedokrwieniem i reperfuzją w alloprzeszczepie tkanek złożonych. Ponadto stosujemy tę procedurę do badania zdarzeń immunologicznych podczas odrzucania alloprzeszczepu tkanek złożonych, a także strategii zapobiegania odrzuceniu. Strategie te obejmują minimalizację, a nawet całkowite uniknięcie immunosupresji podtrzymującej dzięki zastosowaniu ukierunkowanych schematów immunomodulacyjnych.Procedura transplantacji tylnej kończyny u szczura rozpoczyna się od pobrania złożonego przeszczepu tkankowego, polegającego na usunięciu prawej tylnej kończyny od szczura dawcy i przechowywaniu jej w lodzie. Następnie usuwa się prawą tylną kończynę od szczura biorcy, aby przygotować miejsce na kończynę dawcy. Następnie kończynę dawcy wyjmuje się z lodu i transplantuje do organizmu szczura biorcy.W tym modelu anastomozy naczyniowe są wykonywane przy użyciu techniki z mankietem. W naszych eksperymentach wykorzystano samce szczurów rasy Louis Red o masie 250 g. Znieczulenie zindukowano poprzez podanie pentobarbitalu w dawce 50 mg/kg drogą doszpikową.U znieczulonego szczura wygolono i zdezynfekowano okolicę pachwiny oraz kończyny w celu przeprowadzenia procedury. Wymagany jest kompletny zestaw narzędzi mikrochirurgicznych, w tym proste narzędzia mikrochirurgiczne, nożyczki, rozszerzacze naczyń oraz dwie pęsety zakrzywione. Co więcej, najważniejszymi instrumentami są zaprezentowane tutaj mikrochirurgiczne klamry naczyniowe.W celu sprawdzenia głębokości znieczulenia wykorzystuje się odruch uciskowy palca. Szczura umieszcza się na sterylnej platformie i unieruchamia z wszystkimi czterema kończynami w pełnym wyproście przed wykonaniem nacięcia. Kończynę oczyszcza się z wszelkiej sierści, aby zapobiec kontaminacji.Wykonuje się nacięcie w obrębie prawej pachwiny, mniej więcej na poziomie więzadła pachwinowego. Naczynia udowe są widoczne bezpośrednio pod skórą; zostają one wypreparowane za pomocą koagulacji bipolarnej i rozdzielania tępym narzędziem. Następnie wypreparowuje się i koaguluje naczynia nadbrzuszne.Pojedyncza pętla szwu utrzymującego zostaje umieszczona wokół żyły i tętnicy, aby umożliwić trakcję bez bezpośredniego manipulowania naczyniami za pomocą instrumentów po ich rozdzieleniu. Głębokie odgałęzienia tętnicy i żyły zostają podwiązane szwem jedwabnym 8-0 proksymalnie i wypalone dystalnie przed pobraniem kończyny dawcy. 50 jednostek heparyny zostaje podanych do żyły kątowej.Po jednej minucie należy ponownie skupić uwagę na naczyniach udowych. Tętnicę udową podwiązuje się możliwie precyzyjnie za pomocą nici jedwabnej 8-0; tę samą procedurę powtarza się w przypadku żyły udowej. Następnie oba naczynia przecina się dystalnie od podwiązań, a kończynę tylną płucze się przez tętnicę heparynowanym, lodowatym roztworem HDK przez pięć minut.Następnie wszystkie grupy mięśniowe są ostrożnie rozdzielane nożyczkami. Osteotomię wykonuje się za pomocą elektrycznej piły rotacyjnej na poziomie dystalnej treści kości udowej. Pobraną kończynę zanurza się następnie w 20 mililitrach lodowatego roztworu HDK w celu konserwacji i przechowywania w niskiej temperaturze do czasu transplantacji.Operacja u biorcy rozpoczyna się podobnie jak u dawcy, od izolacji i preparowania naczyń udowych. Po starannym preparowaniu naczynia zostają podwiązane jedwabną nicią 8-0 tak dystalnie, jak to możliwe, ale proksymalnie względem odejścia naczyń nadbrzusznych. Następnie przystępuje się do montażu mankietu na żyle biorcy poprzez nasunięcie mankietu z polipropylenu na naczynie.Pojedynczy zacisk naczyniowy zakłada się proksymalnie względem mankietu na żyłę oraz uchwyt mankietu, aby zapewnić pełną hemostazę. Przewiązkę na dystalnym końcu żyły przecina się, a następnie żyłę wywija nad mankietem. Przewiązkę 8-0 zawiązuje się okrężnie wokół naczynia i mankietu, unieruchamiając żyłę biorcy na miejscu.Dokładnie taką samą procedurę wykonuje się dla tętnicy z użyciem mankietu o mniejszej średnicy. Kończyna biorcy jest preparowana analogicznie do kończyny dawcy, z ostrym wycięciem grup mięśniowych i osteotomią wykonaną w połowie kości udowej. Jesteśmy teraz gotowi do przeszczepienia kończyny tylnej.Kończyna dawcy zostaje wyjęta z roztworu HDK. Transplantację rozpoczyna się od osteosyntezy kości udowej, wykorzystując igłę 18G jako pręt śródszpikowy. Końcówkę igły odcina się, a pozostałą część skraca do długości od 1,5 do 2 cm.Grupy mięśni brzusznych są ściśle zbliżone za pomocą pojedynczych szwów przerywanych nicią Vicryl lub proline 4-0, aby ustabilizować kończynę i przygotować ją do anastomozy naczyniowej. W przypadku anastomozy typu cuff, żyła dawcy zostaje rozszerzona, naciągnięta na żyłę biorcy wraz z mankietem i zabezpieczona kolejną okrężną ligaturą 8-0. Tę samą procedurę przeprowadza się w odniesieniu do tętnicy dawcy.Na koniec, gdy oba naczynia zostaną zeszyte, zdejmuje się zacisk żylny, a następnie zacisk tętniczy. Reperfuzja następuje natychmiast i jest łatwo zauważalna dzięki powrotowi koloru kończyny dystalnej i stopy, a także pulsującemu przepływowi w tętnicy. Pozostałe grupy mięśni grzbietowych zostają ponownie zbliżone.Skórę zamyka się za pomocą czterech przerywanych szwów z nici Vicryl lub Prolene, po czym transplantacja zostaje zakończona. Po operacji szczura ogrzewa się na podgrzewaczką, a następnie podaje środki przeciwbólowe i antybiotyki. Stan szczura jest ściśle monitorowany przez 48 do 72 godzin pod kątem objawów stresu lub powikłań chirurgicznych.Technika mankietowa reanastomozy była szeroko stosowana w różnych obszarach badań chirurgicznych w ciągu ostatnich dekad, od modeli transplantacji nerek u zwierząt morskich po modele heterotopowych przeszczepów serca. Pozwala ona na badanie różnych aspektów niedokrwienia, uszkodzeń związanych z reperfuzją, a także zjawisk immunologicznych. Po naszym przeszczepie.W niniejszej pracy przedstawiamy pierwsze zastosowanie tej unikalnej techniki mankietowej w przeszczepie złożonym tkanek kończyny. W modelu małych zwierząt technika mankietowa znacząco skraca czas operacji, zmniejsza wymagane doświadczenie mikrochirurgiczne operatora oraz ogranicza śródoperacyjną utratę krwi w porównaniu z konwencjonalnymi technikami szycia anastomozy.

orthotopic-hind-limb-transplantation-in-rats

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Przeszczepienie ortotopowe kończyny tylnej u szczurów

Przedstawiamy łatwą do wdrożenia modyfikację klasycznej techniki dwóch mankietów stosowanej w ortotopowym przeszczepieniu wątroby u szczura.

Ortotopowa transplantacja wątroby u szczurów

Opisujemy nową technikę heterotopowego przeszczepu płuco-serce w jamie brzusznej (HAHLT) u szczurów. Konfiguracja przeszczepu powoduje częściowo załadowane krążenie przeszczepu, co pozwala na bezpośrednią ocenę funkcjonalną. Model ten może być stosowany do ostrych lub przewlekłych badań funkcji i statusu immunologicznego przeszczepionego przeszczepu.

Szczur Heterotopowe serce brzuszne/przeszczep pojedynczego płuca w konfiguracji z obciążeniem objętościowym

Ten nowatorski model do ortotopowego przeszczepu kończyn tylnych u myszy, wykorzystujący technikę mankietu bez szwów do zespolenia supermikronaczyniowego, stanowi potężne narzędzie do mechanistycznych badań immunologicznych in vivo związanych z unaczynioną allotransplantacją kompozytową (VCA).

Ortotopowy przeszczep kończyn tylnych u myszy

Celem tego manuskryptu i protokołu jest szczegółowe wyjaśnienie i demonstracja procedury chirurgicznej ortotopowego przeszczepu nerki u szczurów. Metoda ta jest uproszczona w celu uzyskania prawidłowej perfuzji nerki dawcy i skrócenia czasu reperfuzji poprzez zastosowanie techniki zespolenia mankietu żylnego i moczowodowego.

Ortotopowy przeszczep nerki szczura: nowatorskie i uproszczone podejście chirurgiczne

Ten protokół przedstawia solidny, powtarzalny model unaczynionego kompozytowego allotransplantu (VCA) nastawiony na jednoczesne badanie immunologii i funkcjonalnego odzyskiwania. Czas zainwestowany w skrupulatną technikę przeszczepu ortotopowego prawej kończyny tylnej w połowie uda z ręcznie szytymi zespoleniami naczyniowymi i koaaptacją neuronalną daje możliwość badania funkcjonalnej regeneracji.

Kolejny krok: ortotopowy model przeszczepu kończyn tylnych z koaaptacją neuronalną w celu maksymalizacji powrotu do sprawności u szczura

Opisujemy model heterotopowego przeszczepu serca w jamie brzusznej u szczurów, sugerując modyfikacje obecnych strategii, które prowadzą do uproszczonego podejścia chirurgicznego. Dodatkowo opisujemy nowatorski model odrzucania przeszczepu poprzez wstrzyknięcie do ucha ważnych komórek mięśnia sercowego, co pozwala na dalsze analizy immunologiczne przeszczepu u szczurów.

Model immunologiczny do heterotopowego przeszczepu komórek serca i mięśnia sercowego u szczurów

Ten artykuł przedstawia częściowy protokół heterotopowego przeszczepu płata kostno-skórnego u szczurów i jego potencjalne wyniki w obserwacji średnioterminowej.

Częściowy heterotopowy model przeszczepu kończyn tylnych u szczurów

Model ortotopowego przeszczepu nerki u szczurów przyczynia się do zbadania mechanizmu odrzucania alloprzeszczepu nerki. Obecny model zwiększa przeżywalność biorców bez zakłóceń w ukrwieniu i refluksu żylnego dolnej części ciała za pomocą zespolenia end-to-end implantacji nerki oraz metody "tunelowej" zespolenia moczowód-pęcherz moczowy.

Ortotopowy model przeszczepu nerki u szczura do odrzucania alloprzeszczepu nerki

Niniejszy artykuł opisuje zmodyfikowaną technikę heterotopowego przeszczepu unaczynionego serca z zaktualizowaną techniką aseptyczną, analgezją i znieczuleniem.

Zmodyfikowany protokół przeszczepu serca heterotopowego u myszy zgodny ze współczesnymi standardami techniki aseptycznej, anestezjologii i analgezji

Protokół ten opisuje ulepszoną technikę ortotopowego przeszczepu lewego płuca u szczurów, koncentrując się na zmniejszeniu trudności operacyjnych i poprawie wskaźników przeżycia.

Ortotopowy przeszczep lewego płuca u szczurów

Poznaj ortotopowy przeszczep kończyn tylnych u szczurów z wykorzystaniem techniki mankietowej do rewaskularyzacji. Ta metoda pozwala badać urazy niedokrwienne oraz odpowiedzi immunologiczne przy odrzucaniu przeszczepu.

Ortotopowe przeszczepianie kończyny tylnej u szczurów

Przeglądaj więcej filmów