Test tworzenia kolonii miękkiego agaru: metoda testowania wpływu nowych związków na proliferację komórek rakowych

Na początek weź odpowiednie stężenie stopionej agarozy do stożkowej probówki i dodaj do niej pożądaną ilość ciepłej pożywki hodowlanej. Delikatnie odwróć, aby wymieszać zawartość. Dodaj tę mieszaninę do każdego dołka sześciodołkowej płytki i pozwól jej zestalić się. To jest dolna warstwa. Następnie potraktuj komórki rakowe interesującym Cię związkiem i dodaj wymagane stężenie agarozy.

Teraz wlej tę mieszaninę zawierającą żądaną liczbę komórek na mililitr do każdej studzienki. Jest to warstwa zawierająca komórkę. Gdy podłoże zastygnie, inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez tydzień. Przygotuj warstwę zasilającą, mieszając agarozę z pożywką i uzupełnij tę mieszaninę interesującym Cię związkiem. Delikatnie dodaj tę warstwę podajnika do każdej studzienki, pozwól jej zestalić się i inkubuj płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza.

Powtarzaj tę procedurę karmienia co tydzień, aby uzupełnić komórki pożywką, aż utworzą się kolonie. Jeśli interesujący nas związek jest inhibitorem rakotwórczości, zahamuje wzrost komórek, co spowoduje powstanie kilku kolonii w studzienkach. W poniższym protokole przeprowadzimy test tworzenia miękkiego kolonii agaru w celu zbadania wpływu inh