JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:38 min. • April 30th, 2023
- Na początek wysiew komórki raka płuc w kolbie T zawierającej pożywkę do hodowli tkankowej i pozwól jej rosnąć przez noc. Następnie zawiesić miRNA ze środkiem transfekującym do pożywki transfekcyjnej. Usuń pożywkę i dodaj pożywkę transfekcyjną, która wprowadzi miRNA do komórek rakowych. miRNA to niekodująca cząsteczka RNA, która wiąże się z komplementarną sekwencją mRNA i blokuje ekspresję genów. Inkubować kolbę przez żądany czas.
Następnie zastąp pożywkę pożywką do hodowli tkankowych i hoduj przez noc. Dodaj trypsynę do dysocjacji komórek. Przenieść mieszaninę do probówki wirówkowej zawierającej PBS i odwirować ją. Usuń supernatant i dodaj bufor do lizy komórek i dodaj ultra czysty etanol do wytrącenia. Umieść mieszaninę w kolumnie oddzielającej w celu oczyszczenia kwasu nukleinowego i odwirowania.
Usunąć przepływ i dodać bufor do płukania, aby usunąć zmieloną błonę komórkową i odwirować. Usunąć bufor płuczący i dodać DNazę z buforem do mineralizacji DNazy w celu usunięcia DNA z próbki i odwirowania. Dodaj bufor przygotowawczy RNA, aby wyizolować RNA i odwirować. Zebrać RNA obecne w supernatancie. W poniższym protokole wykonamy ekstrakcję RNA z komórek raka płuc leczonych miRNA.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych