Mikromacierz przeciwciał: technika badania ekspresji białek w komórkach raka płuc leczonych miRNA

- Zacznij od dodania roztworu biotyny i buforu znakującego do próbki białka. Inkubować, aby ułatwić przyłączanie biotyny do białek. Dodaj odczynnik zatrzymujący i wiruj. Następnie umieść szkiełko mikromacierzy przeciwciał w naczyniu zawierającym odczynnik blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał. Umyj szkiełko wodą podwójnie destylowaną, aby usunąć roztwór blokujący. Umieść szkiełko z mikromatrycą w komorze. Wymieszać biotynylowaną próbkę białka z roztworem sprzęgającym i dodać do szkiełka, aby ułatwić wiązanie docelowych białek z odpowiadającymi im przeciwciałami. Przenieść szkiełko do naczynia zawierającego bufor do przemywania i zastąpić bufor wodą podwójnie destylowaną. Następnie umieść szkiełko w buforze detencyjnym zawierającym znakowaną fluorescencyjnie streptawidynę, aby ułatwić jej wiązanie z biotynylowanymi białkami.

Inkubuj naczynie w ciemności, aby utrzymać intensywność fluorescencji. Wyjmij szkiełko i umieść je w skanerze z mikromacierzą. Skaner poszukuje sygnałów fluorescencyjnych ze streptawidyny związanych z białkiem docelowym. Na podstawie intensywności fluorescencji oprogramowanie analizuje stopień ekspresji białek. W poniższym protokole wykon