Mikromacierz przeciwciał: technika badania ekspresji białek w komórkach raka płuc leczonych miRNA

0 wyświetleń3:02 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Zacznij od dodania roztworu biotyny i buforu znakującego do próbki białka. Inkubować, aby ułatwić przyłączanie biotyny do białek. Dodaj odczynnik zatrzymujący i wiruj. Następnie umieść szkiełko mikromacierzy przeciwciał w naczyniu zawierającym odczynnik blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał. Umyj szkiełko wodą podwójnie destylowaną, aby usunąć roztwór blokujący. Umieść szkiełko z mikromatrycą w komorze. Wymieszać biotynylowaną próbkę białka z roztworem sprzęgającym i dodać do szkiełka, aby ułatwić wiązanie docelowych białek z odpowiadającymi im przeciwciałami. Przenieść szkiełko do naczynia zawierającego bufor do przemywania i zastąpić bufor wodą podwójnie destylowaną. Następnie umieść szkiełko w buforze detencyjnym zawierającym znakowaną fluorescencyjnie streptawidynę, aby ułatwić jej wiązanie z biotynylowanymi białkami.

Inkubuj naczynie w ciemności, aby utrzymać intensywność fluorescencji. Wyjmij szkiełko i umieść je w skanerze z mikromacierzą. Skaner poszukuje sygnałów fluorescencyjnych ze streptawidyny związanych z białkiem docelowym. Na podstawie intensywności fluorescencji oprogramowanie analizuje stopień ekspresji białek. W poniższym protokole wykonujemy mikromacierz przeciwciał do analizy zmian w ekspresji genów związanych z cyklem komórkowym.

- Eksperyment ten ma na celu zidentyfikowanie wszystkich zmian ekspresji białek szlaku cyklu komórkowego w wyniku leczenia mikroRNA. Pobrać próbki białka zgodnie z procedurą opisaną w rozdziale dotyczącym transfekcji i oznaczyć ilościowo za pomocą testu BCA. Wyjmij szkiełka z minus 4 stopni Celsjusza na godzinę przed eksperymentem, aby doprowadzić do temperatury pokojowej i usunąć wilgoć. Pobrać 70 mikrogramów próbek białka i przygotować preparaty podstawowe zgodnie z instrukcją producenta, która jest również opisana krok po kroku w części tekstowej.

W tym miejscu należy zauważyć, że prawidłowe mycie szkiełek ultraczystą wodą dejonizowaną jest kolejnym ważnym krokiem, ponieważ pomoże to zmniejszyć tło slajdów. Ponadto w tym eksperymencie bardzo ważne jest, aby nie wysuszać szkiełek z próbkami aż do ostatniego etapu. Na koniec zeskanuj slajd za pomocą mikromacierzy i przeanalizuj dane.

13:21

Chemicznie blokowana mikromacierz przeciwciał do multipleksowanego profilowania wysokoprzepustowego specyficznej glikozylacji białek w złożonych próbkach

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:26

Analiza transferu miRNA zależnego od złącza szczelinowego za pomocą mikroskopii 3D-FRAP

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:01

Technologia zewnątrzkomórkowych mikromacierzy białkowych do wysokoprzepustowego wykrywania interakcji receptor-ligand o niskim powinowactwie

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:04

Przeprowadzanie niestandardowych eksperymentów z mikromacierzami mikroRNA

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

15:17

Profilowanie białek powierzchniowych komórek raka jelita grubego za pomocą mikromacierzy przeciwciał i multipleksowania fluorescencyjnego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

16:24

Profilowanie regulowanych estrogenem mikroRNA w komórkach raka piersi

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:16

Generacja dwukolorowych mikromacierzy antygenowych do jednoczesnego wykrywania autoprzeciwciał IgG i IgM

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:14

Płynna biopsja na bazie mikroRNA: doświadczenia z klasyfikatorem sygnatury miRNA w osoczu (MSC) do badań przesiewowych w kierunku raka płuc

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:42

Ocena oporności na inhibitory kinazy tyrozynowej poprzez badanie szlaków transdukcji sygnału przez macierze przeciwciał

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:07

Profilowanie mikroRNA płuc w cyklu rujowym u myszy narażonych na działanie ozonu

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026