Przygotowanie płuc myszy do cytometrii przepływowej: generowanie zawiesiny komórkowej z tkanki płucnej do analizy cytometrii przepływowej

- Zacznij od wzięcia uśpionej myszy i zabezpiecz ją taśmą laboratoryjną na desce do sekcji. Użyj nożyczek, aby rozciąć skórę. Wykonaj pionowe nacięcie przez przeponę i przetnij żebra, aby dotrzeć do klatki piersiowej, odsłaniając serce i płuca. Następnie wykonaj małe nacięcie w lewej komorze serca. Następnie zlokalizuj prawą komorę i włóż strzykawkę zawierającą PBS do światła komory. Wykonaj PBS przez prawą komorę, pozwalając krwi wypłynąć z wcześniej przygotowanego nacięcia w lewej komorze, aż płuca staną się białe. Wyjmij tkankę płucną zawierającą guzki nowotworowe i zmiel na małe kawałki.

Inkubować kawałki w buforze do wytrawiania płuc. Kolagenaza w buforze trawienia płuc pomaga izolować komórki, a DNAza pomaga eliminować DNA z martwych komórek. Odcedź powstałą zawiesinę przez sitko do komórek, aby usunąć grudki i ujednolicić zawiesinę komórek. Odwirować i ponownie zawiesić osad w buforze chlorku amonu i potasu w celu lizy pozostałych erytrocytów. Wirować w celu zebrania WBC i komórek nowotworowych w osadzie. Zawiesić osad w PBS uzupełnionym FCS, aby utrzymać stabilność komórki. W poniższym protokole zademonstrujemy przygotowanie zawiesiny komórek płuc do analizy cytometrii prze