Test tworzenia kolonii: ocena skuteczności środków przeciwnowotworowych na komórkach raka płuc tworzących kolonie

- Test tworzenia kolonii to analiza in vitro leku przeciwnowotworowego na wzrost, proliferację i różnicowanie się komórek rakowych w kolonie w pożywkach półstałych. Na początek wysiewaj komórki rakowe w pożywce RPMI z suplementem wzrostu - płodową surowicą bydlęcą lub FBS i antybiotykiem. Inkubuj komórki przez wymagany czas.

Następnie zbierz pożądane stężenie komórek w probówce do mikrofuge i odwirówce. Ponownie zawiesić granulat w PBS. Przygotuj pożywkę na bazie metylocelulozy i dozuj ją do różnych probówek z FBS, aby zapewnić optymalny wzrost.

Dodaj odpowiednią ilość zawiesiny komórkowej do probówek i zwiruj je, aby wymieszać komórki z pożywką. Następnie dodaj związki przeciwnowotworowe do probówek i przygotuj kontrolę, dodając DMSO. Rurki wirowe.

Dodaj tę mieszaninę komórek do płytki hodowlanej i inkubuj przez żądany czas. Po inkubacji dodać bromek difenylotetrazolu metylotiazolu lub MTT i inkubować przez jakiś czas. MTT redukuje żółtą sól tetrazolową w żywotnych komórkach do fioletowych kryształów formazanu. Żywotne kolonie zmieniają kolor na fioletowy. Uchwyć obrazy za pomocą aparatu cyfrowego i przeanalizuj żywotne kolonie. W poniższym protokole zbadamy test tworzenia kolonii