Test immunofluorescencyjny: metoda identyfikacji komórek nowotworowych wychwyconych na przewodzie medycznym
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:32 min. • April 30th, 2023
- Weź funkcjonalizowany drut z małą złotą porcją pokrytą hydrożelem sprzężonym z interesującymi przeciwciałami. Zanurz złotą część drutu w fiolce zawierającej komórki nowotworowe. Zamknij go drucianym korkiem i inkubuj w rotatorze rurowym. Krążące komórki nowotworowe lub CTC wykazujące antygeny powierzchniowe wiążą się z przeciwciałami na drucie. Przepłukać drut, zanurzając go w fiolkach zawierających sól fizjologiczną buforowaną fosforanami lub PBS i wysuszyć na powietrzu. Teraz zanurz drut w roztworze acetonu, aby utrwalić komórki poprzez ich odwodnienie.
Następnie delikatnie przełóż drut przez końcówkę P200 z funkcjonalizowaną częścią w środku. Wypełnij taśmę przeciwciałem sprzężonym z fluorochromem, aby zanurzyć drut. Te znakowane przeciwciała zwiążą się z odpowiednimi antygenami obecnymi na komórkach. Uszczelnij otwór folią laboratoryjną i inkubuj przez noc w ciemności w temperaturze 4 stopni Celsjusza. Następnie umyj drut PBS, aby usunąć wszelkie niezwiązane przeciwciała. Umieść drut w uchwycie drutu i view pod mikroskopem fluorescencyjnym. CTC związane przez przeciwciała fluoryzują na przewodzie. W poniższym protokole uchwycimy CTC na przewodzie medycznym i zidentyfikujemy j
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych