Ekstrakcja miRNA: metoda ekstrakcji miRNA z próbki osocza

- MikroRNA lub miRNA to małe niekodujące RNA biorące udział w regulacji genów. Ich ekspresja ulega zmianie podczas raka, a zatem są potencjalnymi biomarkerami raka. Aby rozpocząć izolację miRNA, weź świeżo pobraną próbkę krwi pełnej i odwiruj w temperaturze 4 stopni Celsjusza, aby oddzielić osocze od komórek krwi. Przenieść supernatant do świeżej probówki i ponownie odwirować, aby uzyskać bardziej klarowny supernatant osocza. Ekstrahować supernatant, potraktować schłodzonym roztworem homogenizacyjnym, a następnie użyć buforu do lizy w celu homogenizacji próbki. Dodaj roztwór enzymu proteinazy K, aby rozbić białka, szczególnie nukleazy, które w przeciwnym razie trawiłyby RNA podczas dalszych etapów.

- Następnie załaduj lizat do wyznaczonej studzienki wstępnie zmontowanego wkładu do ekstrakcji kwasów nukleinowych specyficznego dla danego instrumentu. Dodaj roztwór DNazy 1 do odpowiedniego dołka, aby wyeliminować genomowe DNA z próbki. Dodaj wodę wolną od nukleaz do probówki elucyjnej umieszczonej na kartridżu w celu kondycjonowania przed izolacją miRNA. Załaduj zespół wkładu do ekstraktora kwasów nukleinowych. Wybierz i uruchom odpowiednie oprogramowanie do oczyszczania miRNA. Po zak