JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:59 min. • April 30th, 2023
- Terapia fotodynamiczna lub PDT to leczenie oparte na świetle z udziałem cząsteczek fotouczulających. Cząsteczki te są aktywowane przez światła o określonych długościach fal i przekształcają tlen cząsteczkowy obecny w komórkach w reaktywne formy tlenu, które indukują śmierć komórki. Na początek opracuj mysi model guza płuca, wstrzykując odpowiednie stężenie zawiesiny komórek raka płuc do dolnej flanki znieczulonej myszy. Monitoruj, aż guz urośnie do odpowiedniej objętości.
Następnie należy przygotować zawiesinę pożądanego fotouczulacza umieszczoną w systemie dostarczania nanocząstek ukierunkowanym na raka płuc. Wstrzyknąć tę zawiesinę do żyły ogonowej znieczulonej myszy z guzem. Należy zapewnić wystarczająco dużo czasu, aby fotosensybilizator zawierający nanocząstki dotarł do miejsca guza i wniknął do komórek rakowych.
Następnie znieczul mysz. Umieść laser PDT w optymalnej odległości nad guzem, aby zapewnić równomierne oświetlenie całej jego objętości. Naświetlić guz odpowiednią długością fali przez żądany czas. Trzymaj mysz w klatce w ciemności przez 24 godziny. Monitoruj codzienne zmiany objętości guza. Napromieniowane myszy z guzem, którym wstrzyknięto fotouczulacz, wykazywały zmniejszoną objętość guza. W tym protokole przeanalizujemy skuteczność przeciwnowotworową hipokreliny B, fotouczulacza, zamkniętej w nanocząstkach ceramidu kwasu hialuronowego u myszy z guzem A549.
Zbierz ogniwa A549 i ponownie zawieś milion komórek w 0,1 mililitra pożywki RPMI 1640. Umieść ponownie zawieszone komórki na lodzie. Następnie przygotuj nagą mysz męską BALB/C do wstrzyknięcia. Następnie załaduj komórki do strzykawki o pojemności 1 mililitra wyposażonej w igłę o rozmiarze 26 i wstrzyknij je w lewą flankę myszy. Codziennie mierz rozmiar guza za pomocą suwmiarki.
Gdy rozmiar guza osiągnie około 200 milimetrów sześciennych objętości, rozpocznij eksperyment od pierwszego zważenia każdej myszy. Następnie rozpuść nanocząstki w PBS do końcowego stężenia 2 miligramów na mililitr i załaduj jeden mikrolitr zawiesiny na gram myszy do strzykawki o pojemności 1 mililitra wyposażonej w igłę o rozmiarze 26. Wstrzyknąć nanocząstki przez wstrzyknięcie do żyły ogonowej w dniu zero i siódmym.
24 godziny po każdym wstrzyknięciu należy znieczulić mysz i umieścić buhaja nowotworowego pod włóknem terapii fotodynamicznej tak, aby znajdował się w odległości jednego centymetra od włókna.
Ważne jest, aby pokryć światłem całą powierzchnię guza, aby osiągnąć najlepszy wynik.
Załóż laserowe okulary ochronne, wyłącz przełącznik pokojowy i oświetlaj guz laserem do terapii fotodynamicznej przez 500 sekund zarówno w pierwszym, jak i ósmym dniu. Po leczeniu laserowym trzymaj myszy w klatkach w ciemności przez 24 godziny. Codziennie monitoruj wizualnie objętość guza i zmiany w miejscu guza. Użyj suwmiarki, aby zmierzyć rozmiar guza i codziennie rób zdjęcia miejsc guza, aby sprawdzić, czy nie ma zmian na powierzchni.