Izolacja egzosomów: technika oddzielania egzosomów od osocza pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuc

- Egzosomy to małe, połączone błoną pęcherzyki przenoszące biomolekuły, takie jak lipidy, białka, DNA, mRNA i mikroRNA. Egzosomy są uwalniane przez różne typy komórek do przestrzeni pozakomórkowych i mogą być izolowane z płynów biologicznych, takich jak osocze.

Na początek odwiruj próbkę osocza, aby usunąć komórki i zanieczyszczenia. Przenieść supernatant osocza do świeżej probówki. Potraktuj osocze pożądanym stężeniem enzymu rybonukleazy. Inkubować próbkę w bloku grzewczym w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez odpowiedni czas.

Enzym degraduje wszelkie wolne RNA w próbce, podczas gdy egzosomalny RNA pozostaje chroniony. Rozcieńczyć próbkę za pomocą PBS. Następnie dodać żądane stężenie roztworu enzymu proteinazy K i inkubować w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez odpowiedni czas. Proteinaza K rozkłada większość białek osocza. Dezaktywuje również wcześniej dodany enzym rybonukleazę, eliminując w ten sposób ryzyko degradacji egzosomalnego RNA podczas dalszego przetwarzania.

Dodaj odpowiednią objętość buforu wytrącania egzosomów, aby ułatwić oddzielenie egzosomów od osocza. Odwirować próbkę, aby uzyskać osad zawierający nienaruszone egzosomy. Wyizolowane egzosomy znajdują zastoso