JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:29 min. • April 30th, 2023
- Weź funkcjonalizowany drut z komórkami przyczepionymi do jego powierzchni i wybarwionymi przez barwienie immunofluorescencyjne. Umyj go lodowatą solą fizjologiczną, roztworem cytrynianu sodu lub SSC. Umieść drut w mikroprobówce zawierającej fluorescencyjnie znakowane sondy i zamknij go korkiem z drutu. Inkubuj mikroprobówkę w ciemnej, wilgotnej komorze w piecu hybrydyzacyjnym w temperaturze 75 stopni Celsjusza w celu denaturacji DNA w komórkach.
Przenieś komorę do piekarnika w temperaturze 37 stopni Celsjusza, aby sondy związały się z komplementarną sekwencją na DNA. Następnie wyjmij komorę z piekarnika i wyjmij drut. Zanurz drut w rurce zawierającej roztwór SSC o żądanej temperaturze. Umyj drut roztworem SSC zawierającym Tween w celu usunięcia niespecyficznych lub częściowo zhybrydyzowanych sond i ponownie umyj w wodzie destylowanej.
Wysuszyć drut i inkubować funkcjonalizowaną końcówkę w roztworze DAPI, aby zabarwić jądra komórki. Opłucz drut w PBS i wysusz na powietrzu. Umieść drut pod mikroskopem fluorescencyjnym. Sonda zhybrydyzowana z genem będącym przedmiotem zainteresowania pojawia się jako fluorescencyjna plamka w jądrach komórki. W poniższym protokole wykonamy 3D DNA FIS
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych