Konserwacja tkanek zatopionych w parafinie utrwalonej w formalinie (FFPE): metoda badania morfologii tkanek

- Najpierw umieść plasterek tkanki na bibule filtracyjnej nasączonej PBS, aby zapobiec kurczeniu się komórek lub pęcznieniu poprzez zrównoważenie osmolarności. Przenieś tkankę do kasety histo. Zamknij i umieść kasetę w neutralnym buforowanym roztworze formaliny NBF. NBF zawiera formaldehyd, który wiąże się z grupami aminowymi aminokwasów i zapobiega tworzeniu się kwasu mrówkowego, który pigmentuje tkankę. Pozostaw kasetę na noc w niskiej temperaturze, która zapobiega degradacji kwasów nukleinowych i utrwala tkankę. Odwodnić tkankę wielokrotnymi przemycikami alkoholu.

Umieść go w płynnej parafinie i dociśnij do dna formy. Usuń ciężarek i umieść spód kasety histo na chusteczce. Wlej płynną parafinę na zespół. Poczekaj, aż zestaw zastygnie na zimnej płycie. Parafina jest nierozpuszczalna w wodzie, a po dostaniu się do odwodnionej tkanki twardnieje i pomaga w krojeniu. Przenieś blok tkankowy na mikrotom. Wytnij i zbierz cienkie odcinki tkanki na szkiełku. Jeśli przekrój jest zbyt gruby, tlen i inne składniki odżywcze nie mogą dyfundować w poprzek plasterka, tworząc fałszywy gradient martwicy. Jeśli sekcja jest zbyt cienka, ma tendencję do zwijania się. Film z protokołem bada ekspresję