JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:11 min. • April 30th, 2023
- Organoidy to małe, trójwymiarowe kultury komórkowe pochodzące z komórek macierzystych specyficznych dla tkanki. Są stabilne genomowo, ale genetycznie modyfikowalne poprzez transfekcję, a zatem idealne do badań genetycznych. Do transfekcji należy umieścić organoidy nasienne na wielodołkowej płytce hodowlanej ze specjalną pożywką hodowlaną i inkubować przez żądany czas. Następnie dodaj mieszaninę dysocjacyjną do płytki, aby pomóc w dysocjacji komórek organoidowych. Przenieś mieszaninę do probówki i odwiruj. Zawiesić osad organoidowy w buforze elektroporacyjnym zawierającym fluorescencyjnie znakowane plazmidowe DNA. Bufor stabilizuje komórki i zapobiega ich śmierci z powodu stresu elektrycznego.
Przenieś mieszaninę do kuwety i elektroporuj ogniwa. Impulsy elektryczne przez błonę komórkową powodują tymczasowe tworzenie się porów, aby ułatwić wchłanianie plazmidowego DNA do komórki. Po elektroporacji natychmiast dodać pożywkę hodowlaną do zawiesiny komórek i przenieść mieszaninę do probówki. Teraz odwiruj komórki. Ponownie zawiesić osad w matrycy piwnicznej i przenieść na płytkę wielodołkową w celu polimeryzacji. Umieść płytkę pod mikroskopem fluorescencyjnym i sprawdź fluorescencję w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych