Stymulacja limfocytów T ex vivo w guzie trzustki: metoda zwiększania produkcji cytokin w komórkach T

- Aktywowane limfocyty T przemieszczają się do mikrośrodowiska guza trzustki, gdzie uwalniają cytokiny, takie jak interferon-gamma lub IFN gamma i czynnik martwicy nowotworu alfa lub TNF alfa, co pomaga pośredniczyć w skutecznej odpowiedzi przeciwnowotworowej. Ponieważ cytokiny szybko przemieszczają się z limfocytów T, poziomy wewnątrzkomórkowe mogą być niewykrywalne. Dlatego limfocyty T wymagają stymulacji w celu zwiększenia podstawowej produkcji cytokin w celu zbadania ich terapeutycznej roli w guzie.

Zacznij od pobrania zawiesiny komórek nowotworowych z trzustki myszy. Teraz potraktuj limfocyty T obecne w zawiesinie komórkowej koktajlem stymulacji cytokin i inkubuj mieszankę przez żądany czas. Koktajl ten ułatwia uwalnianie jonów wapnia z retikulum endoplazmatycznego do cytoplazmy. Wysoki poziom wapnia z kolei aktywuje pewne jądrowe czynniki transkrypcyjne, co prowadzi do wzrostu produkcji cytokin w limfocytach T.

Następnie potraktuj komórki koktajlem inhibitorów transportu białek i inkubuj probówkę. Koktajl ten blokuje transport cytokin z retikulum endoplazmatycznego do kompleksu Golgiego, co powoduje akumulację cytokin w komórce. Na koniec wybarwić komórki za pomocą odpowiedni