Obrazowanie dynamiki wapnia w komórkach trzustki: technika badania zmian w czasie rzeczywistym stężenia wapnia cytozolowego w wyspach trzustkowych

- Wyspy trzustkowe to skupisko komórek trzustki wytwarzających hormony, które odgrywają kluczową rolę w utrzymaniu homeostazy glukozy. Podwyższone stężenie glukozy powoduje zamknięcie kanałów jonów potasu, zapobiegając odpływowi jonów potasu, co prowadzi do depolaryzacji błony. W konsekwencji otwierają się zależne od napięcia kanały jonów wapnia, które umożliwiają napływ jonów wapnia. To zwiększone stężenie wapnia cytozolowego stymuluje uwalnianie hormonów, takich jak insulina. W czasie rzeczywistym, aby zobrazować cytozolową dynamikę wapnia, przenieś kilka wysepek obciążonych odpowiednim barwnikiem wskaźnika wapnia między ściankami dystansowymi wstępnie zmontowanej drobnej siatki.

Umieść siatkę do góry nogami na szkiełku nakrywkowym umieszczonym w komorze obrazowania mikroskopu odwróconego. Umieść grubą siatkę i obciążnik, aby unieruchomić komórki. Dodaj roztwór do obrazowania do komory. Następnie skonfiguruj system perfuzyjny, aby wprowadzić glukozę lub hormon testowy, który Cię interesuje. W komórkach wstępnie załadowane fluorescencyjne wskaźniki wapnia zgłaszają wzrost stężenia wapnia w cytozolowym. Po związaniu się z jonami wapnia cząsteczki wskaźnikowe wykazują znaczny wzrost