JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:21 min. • April 30th, 2023
- Zewnątrzwydzielnicza część trzustki składa się z komórek groniastych i komórek przewodowych. Komórki groniaste syntetyzują i wydzielają enzymy trawienne do swojego światła. Komórki przewodowe wyściełają rurkę, która dostarcza te enzymy do jelita cienkiego. Aby przystosować się do stresu genetycznego i środowiskowego, komórki groniaste przechodzą morfologiczną i funkcjonalną transformację w komórki przypominające przewody, zwaną metaplazją acinarną do przewodowej lub ADM.
Czasami ADM może prowadzić do wystąpienia raka trzustki. Aby indukować ADM ex vivo, należy przygotować schłodzoną zawiesinę komórek kolagenowych, łącząc pierwotne komórki groniaste z żelem kolagenowym utrzymywanym na lodzie, aby zapobiec krzepnięciu matrycy. Zawiesinę należy potraktować badanym stymulantem lub inhibitorem ADM, który jest przedmiotem zainteresowania.
Rozprowadź zawiesinę na płytce hodowlanej i inkubuj, aby ułatwić krzepnięcie kolagenu i osadzić w nim komórki. Następnie należy odpipetować dodatkową objętość pożywki zawierającej badany stymulant lub inhibitor ADM będący przedmiotem zainteresowania na zestaloną warstwę komórek kolagenowych.
Inkubować płytkę przez odpowiedni czas. Dzięki indukcji metaplazji acinar-ductal pierwotne komórki groniaste w kształcie piramidy różnicują się, tworząc komórki o morfologii podobnej do komórek przewodowych. W poniższym protokole zademonstrujemy indukcję ex vivo metaplazji acinar-przewodowej w pierwotnych mysich komórkach groniastych przy użyciu TGF alfa jako stymulanta.
- Aby zrobić żel kolagenowy, połącz 7 mililitrów kolagenu typu 1 z ogona szczura, 700 mikrolitrów 10-krotnego podłoża Waymouth i 466,6 mikrolitrów 0,34 molowego wodorotlenku sodu w 50-mililitrowej tubce na lodzie, aby uzyskać żel kolagenowy. W 50-mililitrowej probówce po trzygodzinnej inkubacji połącz równe objętości zawiesiny komórkowej i żelu kolagenowego i delikatnie wymieszaj. Płytka 2,000 mikrolitrów po jednym dołku na sześciodołkowej płytce, trzymając płytkę na lodzie i wirować, aby równomiernie rozprowadzić warstwę komórek kolagenu.
Aby zestalić pożywkę, inkubuj płytkę w inkubatorze do hodowli komórkowych w temperaturze 37 stopni Celsjusza i 5% dwutlenku węgla przez 30 minut. Następnie dodaj 1,5 mililitra na studzienkę 1 razy kompletnej pożywki Waymouth z pożądanym bodźcem lub inhibitorami.
Zmień podłoże następnego dnia, a następnie co drugi dzień. W zależności od zastosowanego bodźca, metaplazję acinarno-przewodową (ADM) można zaobserwować między trzecim a piątym dniem.