Izolacja wysp trzustkowych poprzez perfuzję kolagenazy: enzymatyczna metoda izolowania komórek wysp trzustkowych

- Komórki wysp trzustkowych w trzustce wytwarzają niezbędne hormony biorące udział w funkcjach hormonalnych. Aby wyizolować wysepki, najpierw zabezpiecz mysz poddaną eutanazji i chirurgicznie odsłonij jej jamę brzuszną. Odsuń na bok wątrobę i jelita, aby zlokalizować i zacisnąć wspólny przewód żółciowy. Zidentyfikuj bańkę Vater, przewód utworzony przez połączenie trzustki i wspólnych dróg żółciowych.

Następnie wstrzyknąć roztwór enzymu kolagenazy do wspólnego przewodu żółciowego. Przepływ zwrotny z przewodu skutecznie napompowuje trzustkę, ułatwiając indukowaną kolagenazą dysocjację tkanek trzustki. Wyciąć trzustkę do probówki zawierającej więcej roztworu kolagenazy. Mechanicznie posiekaj tkankę i inkubuj, aby wspomóc trawienie tkanek przez kolagenazę.

Po uzyskaniu jednorodnej zawiesiny należy zatrzymać trawienie enzymatyczne poprzez dodanie roztworu zawierającego białka hamujące aktywność kolagenazy. Odwirować w celu zebrania osadu tkankowego. Ponownie zawiesić osad w podłożu o gradiencie o odpowiedniej gęstości, nałożyć na niego odpowiedni bufor i odwirować w celu wytworzenia warstw gradientowych.

Zebrać wysepki z warstwy utworzonej między ośrodkiem gradientu gęstości a buforem.