JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:29 min. • April 30th, 2023
- Sferoidy to trójwymiarowe modele hodowli komórkowych in vitro. W przypadku barwienia immunofluorescencyjnego najpierw wygeneruj hodowlę sferoidalną wymaganego typu komórek na płytce wielodołkowej. Za pomocą mikropipety z końcówką z szerokim otworem zbierz sferoidy, uważając, aby nie pękły z powodu sił ścinających.
Następnie utrwal i prześledź sferoidy, aby poszczególne komórki były przepuszczalne. Teraz inkubuj z roztworem zawierającym białka, aby zablokować niespecyficzne miejsca interakcji białkowych na powierzchni komórki. Potraktuj sferoidy pożądanym koktajlem przeciwciał pierwotnych. Inkubuj, aby przeciwciała związały się z cząsteczkami docelowymi na powierzchni komórki.
Następnie oznacz sferoidy fluorescencyjnie znakowanym roztworem przeciwciał drugorzędowych specyficznym dla przeciwciał pierwszorzędowych. Na koniec potraktuj sferoidy odpowiednim fluorescencyjnym barwnikiem wiążącym DNA, aby wybarwić jądra komórkowe. Za pomocą laserowego skaningowego mikroskopu fluorescencyjnego zobrazuj wiele przekrojów optycznych sferoidy w różnych płaszczyznach optycznych.
Uchwycone obrazy odzwierciedlają znakowane fluorescencyjnie jądra i antygeny będące przedmiotem zainteresowania. Poł
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych