Generowanie mysiego modelu raka jelita grubego PDOX: badanie progresji raka jelita grubego w modelu mysim

- Węzły chłonne lub LN zapewniają mikrośrodowisko dla wzrostu guza ze względu na komórki zrębu obecne w LN. Pęcherzykowe komórki dendrytyczne lub FDC są najliczniejszymi typami komórek zrębu, które uwalniają chemokiny, cytokiny i czynniki wzrostu, które oddziałują z komórkami macierzystymi raka jelita grubego i zwiększają wzrost guza.

FDC sprzyjają również przerzutom pozawęzłowym raka jelita grubego do narządów takich jak płuca i wątroba. Aby zbadać progresję raka jelita grubego, wszczepiamy komórki rakowe pochodzące z guza pacjenta do narządu, który odpowiada histotypowi guza w mysim modelu z obniżoną odpornością, znanym jako ksenoprzeszczep ortotopowy pochodzący od pacjenta lub PDOX.

Zacznij od zabezpieczenia znieczulonej myszy w pozycji leżącej na desce sekcyjnej za pomocą taśmy laboratoryjnej. Teraz wymieszaj wymaganą ilość komórek raka jelita grubego znakowanych lucyferazą i FDC w probówce. Powstałą zawiesinę należy pobrać do strzykawki. Następnie zlokalizuj otwór odbytu myszy i wstrzyknij przygotowaną mieszankę raka jelita grubego do warstwy podśluzówkowej odbytnicy.

Aby zaobserwować obciążenie przerzutowe, należy co tydzień wstrzykiwać lucyferynę dootrzewnowo i obrazować mysz za pomocą obrazowania bioluminescencyjnego. W obecności enzymu lucyferazy i ATP lucyferyna w komórkach rakowych przekształca się w oksylucyferynę, emitując niebiesko-zielone światło. W poniższym protokole wygenerujemy ortotopowy model myszy ksenoprzeszczepu do badania progresji raka jelita grubego.

- Aby stworzyć model myszy CRC, umieść znieczulonego sześcio- do ośmiotygodniowego samca myszy NOD SCID w pozycji leżącej pod mikroskopem preparacyjnym, mocując pysk do stożka nosowego izofluranu, a przednie kończyny taśmą zapewniającą stabilność. Umieść mały przedmiot, taki jak mały odcinek gazy, pod podstawą ogona, podnosząc odbyt, aby poprawić widoczność i kąt. Użyj zakrzywionych, nasmarowanych, tępo zakończonych kleszczy, aby rozszerzyć kanał odbytu i odsłonić dystalną błonę śluzową odbytu i odbytnicy oraz usunąć kał.

Podłącz sterylną wyjmowaną igłę o rozmiarze 30 do szklanej strzykawki o pojemności 50 mikrolitrów. Pobrać do strzykawki 10 mikrolitrów zawiesiny guza i komórek HK przygotowanych w poprzednich krokach. Wstrzyknij 10 mikrolitrów do dystalnej tylnej tylnej błony podśluzowej odbytnicy, 1 do 2 milimetrów powyżej kanału odbytu, uważając, aby nie przejść do jamy miednicy. Na koniec wyjmij mysz ze stożka nosowego izofluranu i obserwuj ją przez godzinę zgodnie z procedurą w poszukiwaniu oznak niepokoju.