JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 3:36 min. • April 30th, 2023
- Radioimmunoterapia precelowana lub PRIT wykorzystuje immunokoniugat lub konstrukt przeciwciała, który wiąże się z radioaktywnym ligandem, wykazując jednocześnie wysokie powinowactwo do antygenu powierzchniowego komórek specyficznych dla nowotworu. Aby wstępnie wycelować, należy przyjąć pożądane stężenie tych przeciwciał w strzykawce potraktowanej białkami albuminy surowicy. Leczenie surowicą zapobiega wiązaniu się tych przeciwciał ze ściankami strzykawki.
Następnie umieść model myszy z guzem jelita grubego pod lampą grzewczą, aby rozszerzyć jego żyłę ogonową. Wstrzyknąć przeciwciała do rozszerzonej żyły. Gdy te immunokoniugaty docierają do miejsca guza, ich wysokie powinowactwo do specyficznego dla nowotworu antygenu powierzchniowego komórki sprzyja ich akumulacji w tkance.
Następnie należy przyjąć odpowiednią dawkę radioaktywnego ligandu. Podaj radioligand do poszerzonej żyły ogonowej wstępnie ukierunkowanej myszy. Gdy cząsteczki te dotrą do miejsca guza, łączą się z przeciwciałami. Wysoka dawka promieniowania emitowana podczas rozpadu promieniotwórczego tych ligandów zabija docelowy guz, jednocześnie minimalizując narażenie na normalne komórki.
W poniższym protokole pokażemy wstępnie ukierunkowaną radioimmunoterapię z wykorzystaniem przeciwciał modyfikowanych trans-cyklooktenem i radioligandów tetrazenowych znakowanych lutetem-177 w mysim modelu raka jelita grubego.
- Sortuj samice nagich myszy atymicznych z ksenoprzeszczepem raka jelita grubego, tak aby średnia objętość guza w każdej kohorcie była mniej więcej równa. Aby to zrobić, wymień numery identyfikacyjne zwierząt, wzór wcięcia w uszach i objętość guza w trzech oddzielnych kolumnach arkusza kalkulacyjnego. Sortuj dane od najmniejszej do największej objętości guza. W czwartej kolumnie przypisz każdemu zwierzęciu numer klatki.
Przełączaj się między klatkami w wężowy wzór, aż wszystkie zwierzęta zostaną przypisane do klatki. Po przypisaniu klatek posortuj dane według numeru klatki. Aby wstrzyknąć immunokoniugat, należy pobrać dawki 150 mikrolitrów roztworu huA33-TCO w strzykawkach wstępnie potraktowanych 1% albuminą surowicy bydlęcej w PBS i przechowywać te strzykawki na lodzie. Aby wstrzyknąć radioligand, należy najpierw pobrać dawki w 150 mikrolitrach 0,9% sterylnego roztworu soli fizjologicznej zawierającego 1,1 molową równowartość znakowanego radioaktywnie Tz-PEG7-DOTA w stosunku do podanej ilości huA33-TCO.
Użyj suwmiarki, aby zmierzyć najdłuższy bok podłużnego guza, a także szerokość, która jest prostopadła do długości. Zważ każdą mysz na wadze, aby śledzić przyrost lub utratę wagi w czasie. Na koniec oblicz objętość, korzystając ze wzoru na objętość elipsoidy, zakładając, że wysokość jest w przybliżeniu równa szerokości.