Izolacja DNA drobnoustrojów kału: badanie wpływu wzbogacenia środowiska na różnorodność mikrobiomu w mysim modelu guza

0 views • 3:46 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Wzbogacanie środowiska lub EE odnosi się do modyfikacji parametrów pomieszczeń w celu uzyskania korzystnego wpływu na różne choroby, takie jak rak. U myszy z nowotworem EE aktywuje układ odpornościowy i zmniejsza stan zapalny, co ostatecznie poprawia mikrobiotę jelitową i poprawia przeżywalność. Aby zbadać zmiany w mikrobiocie jelitowej, dodaj żądaną ilość buforu do lizy stolca do probówki zawierającej stolec myszy.

Odwirować próbkę i przenieść supernatant do świeżej probówki do mikrowirówki. Dodaj bufor do lizy chlorku guanidyny, który denaturuje DNazę i RNazę. Następnie dodaj etanol i przenieś próbkę do kolumny wirowej z krzemionką.

Etanol pomaga DNA wiązać się z krzemionką. Odwirować próbkę. Teraz przenieś kolumnę do świeżej probówki mikrowirówkowej i dodaj bufor elucyjny do kolumny, aby wymyć DNA.

Odwirować próbkę i wyrzucić kolumnę. Przenieś próbkę do probówki PCR i uruchom PCR w celu amplifikacji DNA. Załaduj DNA na żel agarozowy i wykonaj elektroforezę, aby określić ilościowo rozmiar DNA drobnoustrojów. W poniższym protokole wyizolujemy DNA z kału, aby przeanalizować wpływ EE na mikrobiotę okrężnicy u myszy rakotwórczej.

- Wykorzystaj komercyjny zestaw do wyizolowania drobnoustrojowego DNA ze stolca zgodnie z protokołem wykrywania patogenów w stolcu. W tym celu należy przenieść próbki z zamrażarki o temperaturze minus 80 stopni Celsjusza na suchy lód i zważyć je. Następnie należy przeprowadzić test PCR, który amplifikuje DNA drobnoustrojów zgodnie z opisem w protokole tekstowym. Następnie oczyść produkty reakcji za pomocą kulek magnetycznych.

W celu oczyszczenia, najpierw należy na krótko odwirować płytkę amplikonową PCR, aby wyciągnąć produkty reakcji. Następnie należy wymieszać kulki magnetyczne, aby równomiernie je rozproszyć i przenieść 20 mikrolitrów porcji do każdej studni reakcyjnej. Dokładnie wymieszać kulki z roztworem, powoli pipetując całą objętość 10 razy. Następnie pozwól koralikom osiąść na 5 minut.

Następnie umieść płytkę PCR na stojaku magnetycznym i odczekaj 2 minuty, aż supernatanty znikną po magnetycznym zebraniu kulek. Następnie usunąć i wyrzucić supernatanty. Następnie, trzymając płytkę nadal na magnesie, napełnij każdą studzienkę koralików 200 mikrolitrami świeżego 80-procentowego etanolu i odczekaj 30 sekund. Następnie ostrożnie usuń supernatant.

Powtórz ten krok prania raz i pozostaw koraliki do wyschnięcia na powietrzu przez 10 minut. Teraz wymyj produkty reakcji z kulek, wyjmując płytkę ze stojaka magnetycznego i dodając 52,5 mikrolitrów Tris do każdej studzienki. Całkowicie wymieszać kulki z roztworem, odpipetowując powoli całą objętość 10 razy. Następnie zbierz kulki na stojaku magnetycznym jak poprzednio i przenieś 50 mikrolitrów supernatantów na czystą płytkę PCR. Przykryj płytkę przezroczystym klejem i przechowuj ją w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza do tygodnia.

06:50

Wykorzystanie pudełka z puzzlami jako sposobu oceny skuteczności wzbogacania środowiska

Related Videos

0 Views

09:30

Protokół trzymania myszy w wzbogaconym środowisku

Related Videos

0 Views

07:02

Zapewnienie znaczącego wzbogacenia środowiska i pomiar kortyzolu w ślinie u świń trzymanych na podłodze rusztowej

Related Videos

0 Views

09:01

Nieinwazyjna ocena skuteczności nowych terapii patologii jelitowych za pomocą seryjnego obrazowania endoskopowego żywych myszy

Related Videos

0 Views

08:14

Metoda określania wpływu wzbogacania środowiska na bioróżnorodność biomu mikrobiomu jelita grubego w mysim modelu guza jelita grubego

Related Videos

0 Views

08:32

Wzbogacenie i charakterystyka mikrośrodowisk immunologicznych i nieimmunologicznych guza w ustalonych podskórnych guzach myszy

Related Videos

0 Views

11:22

Analiza mikrobioty za pomocą dwuetapowej reakcji PCR i sekwencjonowania genów 16S rRNA nowej generacji

Related Videos

0 Views

05:28

Analiza dynamiki mikrobioty kałowej u myszy podatnych na toczeń przy użyciu prostej, opłacalnej metody izolacji DNA

Related Videos

0 Views

07:32

Izolacja kału myszy i przeszczep mikrobioty

Related Videos

0 Views

07:45

Przygotowanie i utrzymanie eksperymentu z izododatnią klatką z wykluczeniem biologicznym do przeszczepu kału u myszy wolnych od zarazków

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026