JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:55 min. • April 30th, 2023
- Organoidy to trójwymiarowe konstrukty komórkowe in vitro, które samoorganizują się, naśladując kluczowe cechy tkankowe narządu, z którego pochodzą. Aby rozpocząć znakowanie, należy potraktować zebrane organoidy koktajlem enzymów proteolitycznych i kolagenolitycznych w celu dysocjacji komórek do zawiesiny. Odwirować w celu oddzielenia komórek od supernatantu zawierającego enzymy. Odrzucić supernatant. Rozpuścić osad komórkowy za pomocą pożywki zawierającej wektory lentiwirusowe. Te rekombinowane wirusy przenoszą sekwencję kodującą białko zielonej fluorescencji lub GFP.
Wirusy łączą się z komórkami i uwalniają swój materiał genetyczny oraz niektóre enzymy wirusowe do cytoplazmy. Wirusowa odwrotna transkryptaza syntetyzuje komplementarne wirusowe DNA, które przemieszcza się do jądra gospodarza. Integraza wirusowa pomaga włączyć wirusowe DNA zawierające sekwencję GFP do genomu gospodarza. Hoduj te transdukowane komórki w macierzy zewnątrzkomórkowej lub płytce hodowlanej pokrytej ECM. Odessać pożywkę i odwirować, aby zebrać wszelkie nieprzyłączone komórki. Zawieś komórki w dodatkowym ECM.
Nałóż zawiesinę na przylegającą kulturę, aby zwiększyć żywotność komórek. Gdy matryca zestali, do
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych