Mysie modele spontanicznych przerzutów: platforma do badania potencjału przerzutowego komórek raka jelita grubego wstrzykiwanych ortotopowo
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:57 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od kultury białka zielonej fluorescencji lub GFP, wyrażającego organoidy raka jelita grubego. Zbierz organoidy. Potraktuj roztworem enzymu odłączającego komórki, aby zdysocjować organoidy w zawiesinę jednokomórkową. Odwirować w celu oddzielenia supernatantu zawierającego enzym. Usunąć supernatant. Zawiesić komórki raka jelita grubego wykazujące ekspresję GFP za pomocą sztucznej pożywki zawierającej macierz zewnątrzkomórkową. Załadować zawiesinę komórek do strzykawki i utrzymywać ją na lodzie, aby zapobiec zestaleniu się matrycy w temperaturze otoczenia.
Następnie przygotuj znieczuloną mysz w pozycji leżącej. Delikatnie wyciągnij warstwę śluzówkową odbytnicy przez otwór odbytu. Teraz wstrzyknij przygotowaną zawiesinę komórek rakowych wykazujących ekspresję GFP do warstwy podśluzówkowej odbytnicy zawierającej sieć naczyń krwionośnych. Pozwól myszy na odzyskanie sprawności.
W ciągu kilku dni w miejscu wstrzyknięcia rozwija się guz pierwotny wykazujący ekspresję GFP. W przypadku spontanicznych przerzutów te komórki nowotworowe odłączają się i wchodzą do krążenia. W końcu komórki wynanaczyniają się do odległych narządów i namnażają się, tworząc guzy przerzutowe GFP-dodatnie. W
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych