JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:19 min. • April 30th, 2023
- Zacznij od pobrania znieczulonej warunkowo zmutowanej myszy ze zmodyfikowanym genomem zawierającym specyficzne sekwencje rozpoznawania enzymów rekombinazy Cre zwane wstawkami LoxP, które otaczają pożądany gen supresorowy guza, który ma zostać zmutowany. Chirurgicznie odsłonić jamę brzuszną. Zlokalizuj dystalną okrężnicę i zaciśnij jej górną część. Przezodbytniczo włóż rurkę klasy medycznej i wsuń ją do dystalnej okrężnicy. Przepłucz okrężnicę solą fizjologiczną, aby usunąć wszelkie kały. Wymień rurkę. Zaciśnij dolną część okrężnicy w celu segmentacji. Nadmuchać segment za pomocą odpowiedniego roztworu do dysocjacji komórek. Powoduje to perforację bariery śluzówkowej i zwiększa dostępność komórek krypty jelitowej. Wypłukać roztwór dysocjacyjny.
Następnie wstrzyknąć zawiesinę adenowirusową do segmentu okrężnicy. Te zmodyfikowane wektory wirusowe kodują enzymy rekombinazy Cre. Wirus wnika do komórki, uwalnia swoje DNA do jądra i ulega ekspresji enzymów. Białka rozpoznają insercje LoxP w genomie gospodarza i katalizują rekombinację specyficzną dla miejsca, dezaktywując w ten sposób gen supresorowy guza. Ta mutacja powodująca utratę funkcji sprzyja progresji raka. Zszyj nacięcie i poz
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych