JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:28 min. • April 30th, 2023
- Tau jest białkiem związanym z mikrotubulami, zaangażowanym w stabilizację i składanie mikrotubul. Wiele komórek nowotworowych ulega ekspresji hiperfosforylowanego białka tau, które nie jest w stanie utrzymać dobrze zorganizowanego wiązania mikrotubul. Aby zbadać interakcję między białkiem tau a mikrotubulami, dodaj lizat komórek rakowych zawierający białko tau i roztwór roboczy mikrotubul w probówce do mikrofuge.
Nieufosforylowane białka tau obecne w lizacie komórkowym wiążą się z mikrotubulami. Teraz dodaj żądaną ilość buforu PEM do probówki, aby ustabilizować aktywność tubuliny, białka, które polimeryzuje w włókna, tworząc mikrotubule. Inkubuj mieszaninę przez żądany czas.
Odwirować mieszaninę w celu osadzenia białka związanego z mikrotubulami. Niezwiązane białko pozostaje w supernatancie. Przenieść supernatant do świeżej probówki i ponownie zawiesić osad w odpowiednim buforze. Dodać bufor ładujący żel do ponownie zawieszonej zawiesiny osadów i uruchomić próbki na żelu poliakrylamidowym, aby oddzielić białko związane z mikrotubulami i elektroblot na odpowiedniej membranie.
Dodać odpowiednie przeciwciała i rozwinąć blot za pomocą substratu chemiluminescencyjnego w celu identyfik
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych