Izolacja CTC z próbki krwi pełnej: metoda uzyskiwania CTC z mysiego modelu raka jelita grubego

- Krążące komórki nowotworowe (CTC) to komórki rakowe, które wywodzą się z guza pierwotnego i dostają się do krążenia krwi. Większość CTC może przetrwać w krwiobiegu bez przyczepiania się do powierzchni; Dlatego możemy je wykryć bezpośrednio z krwi większości pacjentów z rakiem.

CTC we krwi mogą wskazywać na rozprzestrzenianie się guza w organizmie, dlatego ich identyfikacja pomaga zrozumieć progresję raka. Zacznij od pobrania znieczulonego mysiego modelu raka jelita grubego i pobierz krew przez nakłucie serca. Przenieść krew do stożkowej probówki zawierającej pożywkę o gradionym gradiencie gęstości i odwirować w celu oddzielenia składników krwi.

Odrzucić najwyższą warstwę zawierającą osocze i zebrać frakcję komórek jednojądrzastych krwi obwodowej lub PBMC obecną na granicy faz w oddzielnej probówce. Następnie dodaj przeciwciało anty-EpCAM do komórek PBMC i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym. Krążące CTC wyrażają marker komórkowy znany jako cząsteczka adhezyjna komórek nabłonka lub EpCAM. Dlatego przeciwciała anty-EpCAM mogą pomóc w identyfikacji EpCAM dodatnich CTC.

Zbierz CTC i przechowuj je do dalszej analizy. W poniższym protokole zidentyfikujemy CTC wykazujące ekspresję