Mikrodysekcja laserowa: technika izolowania inwazyjnych komórek raka jelita grubego z modelu hodowli organotypowej 3D

- Organotypowe modele 3D raka jelita grubego to hodowle in vitro zaprojektowane tak, aby naśladować mikrośrodowiska guza in vivo. Hodowla często zawiera komórki zrębu, takie jak fibroblasty, hodowane wspólnie z komórkami nabłonkowymi raka jelita grubego, w odpowiednim mikrośrodowisku macierzy zewnątrzkomórkowej.

W ustalonych hodowlach komórki nowotworowe z potencjałem przerzutowym atakują macierz zewnątrzkomórkową. Aby wyizolować te atakujące komórki, najpierw potraktuj model organotypowy formaldehydem w celu utrwalenia komórek i macierzy zewnątrzkomórkowej. Inkubować z alkoholem w celu odwodnienia próbki.

Następnie zanurz w płynnym wosku parafinowym, aby wytworzyć blok tkanki. Użyj ultramikrotomu, aby uzyskać cienko pokrojone kawałki. Zamontuj sekcje na odpowiednim szkiełku szkiełkowym.

Dodaj ksylen, aby odparafinować sekcje. Sekwencyjnie inkubować skrawki w malejących stężeniach etanolu w celu ponownego uwodnienia próbek.

Traktuj fioletem krezylowym, aby zabarwić i odróżnić komórki raka jelita grubego od mikrośrodowiska. Umieść szkiełko witrażowe stroną zadrukowaną do dołu na stoliku mikroskopu. Za pomocą odpowiedniego oprogramowania zidentyfikuj komórki, które mają zostać poddan