Modelowanie ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjenta: technika generowania mysich modeli czerniaka

- W modelach ksenoprzeszczepów lub PDX pochodzących od pacjentów, komórki nowotworowe lub fragmenty pochodzące od pacjentów są wszczepiane myszom z niedoborem odporności. Modele PDX symulują biologiczną i molekularną charakterystykę mikrośrodowiska ludzkiego nowotworu. Aby opracować model PDX czerniaka, najpierw należy pobrać tkankę nowotworową od pacjenta z czerniakiem. Usuń tkankę martwiczą z guza. Zmiel guz, aby uzyskać zawiesinę. Następnie przygotuj znieczuloną mysz biorcy w pozycji leżącej. Wykonaj małe nacięcie chirurgiczne na skórze grzbietowej. Delikatnie przetnij błonę powięziową lub warstwę luźnej tkanki łącznej tuż pod skórą. Oddziela to skórę od leżących pod nią warstw mięśniowych i pomaga stworzyć kieszeń do implantacji guza.

Delikatnie przenieś zawiesinę guza do kieszeni. Teraz podaj sztuczną macierz zewnątrzkomórkową do kieszeni, aby ustabilizować i zabezpieczyć wszczepione komórki nowotworowe. Chirurgicznie zszyj ranę i pozwól myszy dojść do siebie. Monitoruj mysz biorcy co tydzień, aby obserwować wzrost guza ksenoprzeszczepu. W poniższym protokole zademonstrujemy podskórne wszczepianie komórek nowotworowych czerniaka pochodzących od pacjenta do myszy NSG z niedoborem odporności w celu wygenerowania modeli ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjenta z czerniakiem.

- Aby wszczepić tkankę po chirurgicznym wycięciu lub biopsji chirurgicznej, najpierw zgol włosy z dolnej części pleców znieczulonych myszy NSG w wieku od sześciu do ośmiu tygodni, pozostawiając około 1,5 centymetra do 3 centymetrów obszaru bez włosów. Przygotuj kawałki guza i podziel zawiesinę guza na szalce Petriego na pojedyncze kopce do implantacji chirurgicznej. Za pomocą ostrza skalpela wykonaj nacięcie o długości około 5 milimetrów na środku grzbietu myszy. Za pomocą jednej pary kleszczy podnieś skórę po stronie nacięcia naprzeciwko operatora. Z drugiej strony za pomocą nożyczek oddziel skórę od warstwy mięśniowej, delikatnie przecinając błonę powięziową małymi nacięciami nożycowymi, tworząc w ten sposób kieszeń na tkankę nowotworową.

Użyj ostrza skalpela, aby podnieść jeden fragment guza, a także jeden pojedynczy kopiec tkanki zawiesiny guza i delikatnie umieść tkankę w utworzonej kieszeni. Następnie dodaj 100 mikrolitrów sztucznej macierzy zewnątrzkomórkowej na wzgórek tkanki nowotworowej w kieszeni. Za pomocą dwóch par kleszczy pociągnij nacięcie na obu końcach, tak aby krawędzie rany zbliżyły się do siebie. Następnie przyłóż jeden lub dwa klipsy do rany, aby zamknąć ranę. Podskórnie wstrzyknąć 1-5 miligramów na kilogram środka przeciwbólowego. Po zakończeniu gojenia, po około 7 dniach, usuń klipsy do ran.