Metoda wiszącej kropli: technika generowania sferoid czerniaka 3D

- Sferoidy to trójwymiarowe modele hodowli komórkowych in vitro, które naśladują architekturę guza in vivo i pomagają badać interakcje wewnątrz guza. Aby założyć hodowlę, najpierw przygotuj jednokomórkową zawiesinę komórek czerniaka w odpowiednim pożywce. Następnie należy umieścić małe objętości tej zawiesiny komórkowej, wystarczająco oddalone od siebie, na wewnętrznej powierzchni pokrywki sterylnego, nieprzywierającego naczynia hodowlanego. Ostrożnie odwróć pokrywkę i umieść ją na dnie naczynia hodowlanego zawierającego PBS, aby utworzyć komorę nawadniającą. Inkubować płytkę w odpowiednich warunkach.

Wilgoć z PBS zapobiega parowaniu mediów z wiszących kropli. Odśwież krople, zastępując kilka mikrolitrów pożywki. Dzięki napięciu powierzchniowemu kropelki zachowują swój kulisty kształt i pozostają zawieszone na wewnętrznej powierzchni płytki. Siły grawitacyjne ułatwiają komórkom pozostawanie w zawiesinie bez rozprzestrzeniania się, ale agregują, tworząc trójwymiarowe sferoidy w kropelkach. Na koniec przepłucz kropelki PBS, aby zebrać sferoidy. Zbierz je w nieprzywierającym naczyniu hodowlanym.

W poniższym protokole zademonstrujemy generowanie trójwymiarowych sferoid komórek czerniak