JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:54 min. • April 30th, 2023
- Skóra składa się z różnych komórek zasiedlających jej różne warstwy. Melanocyty, komórki wytwarzające melaninę, lokalizują się na styku naskórkowo-skórnym, podczas gdy fibroblasty, komórki wytwarzające tkankę łączną, znajdują się w skórze właściwej.
Aby szybko wyizolować melanocyty i fibroblasty, zacznij od pobrania pnia uśpionego szczeniaka myszy. Przetnij skórę brzusznie na całej długości tułowia. Oderwij skórę zawierającą warstwę naskórka i skóry właściwej i zmiel tkankę na małe kawałki.
Teraz potraktuj buforem trawiennym zawierającym enzymy trypsyny i kolagenazy, które degradują macierz zewnątrzkomórkową, uwalniając komórki do zawieszenia. Odwirować w celu granulacji komórek i odrzucić supernatant. Ponownie zawiesić komórki w pożywce melanocytowej i przenieść zawiesinę do płytki wielodołkowej.
Podczas hodowli większość fibroblastów przylega do dna studzienki, podczas gdy melanocyty i inne komórki naskórka pozostają w zawiesinie. Odessać zawieszone komórki i dodać pożywkę specyficzną dla fibroblastów do kultury fibroblastów, aby pobudzić ich wzrost. Przenieść zasysaną zawiesinę do świeżej studzienki pokrytej kolagenem, aby wspomóc tworzenie przylegającej kultury.
Uzupełnij gen
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych