Preparat wirionu rekombinowanego poliomawirusa z komórek Merkla (MCPyV): technika wytwarzania rekombinowanego wirionu MCPyV o wysokim mianie
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 5:53 min. • April 30th, 2023
- Poliomawirus z komórek Merkla lub MCPyV jest dwuniciowym onkowirusem DNA o okrągłym genomie, który powoduje raka z komórek Merkla, rodzaj raka skóry. Aby przygotować wiriony MCPyV, najpierw potraktuj przylegającą kulturę komórek pakujących koktajlem zawierającym środek transfekcyjny, genom wirusa i dwa plazmidy ekspresyjne kodujące białka wymagane do promowania replikacji wirusa.
Podczas inkubacji odczynnik do transfekcji tworzy lipopleksy z plazmidami, ułatwiając ich dostarczanie do komórek pakujących. Po wejściu do jądra maszyneria komórkowa umożliwia ekspresję genomów wirusa i plazmidu. Plazmidy ekspresyjne kodują białka antygenu dużego guza i antygenu małego guza. Białka te przemieszczają się do jądra i napędzają replikację wirusowego DNA. Następnie genom wirusa koduje strukturalne białka kapsydu. Białka te przemieszczają się do jądra i pomagają w składaniu rekombinowanych wirionów.
Następnie zbierz wyhodowane komórki. Potraktuj je roztworem zawierającym detergent i DNazę. Detergent przeprowadza lizę komórek w celu uwolnienia wirusów. DNaza rozkłada wolne plazmidowe DNA z zawiesiny. Odwirować w celu oddzielenia resztek komórkowych w osadzie. Załadować supernatant zawierający
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych