Modyfikacja genetyczna pierwotnych ludzkich keratynocytów: metoda genetycznej manipulacji keratynocytami przy użyciu rekombinowanych retrowirusów
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 4:07 min. • April 30th, 2023
- Keratynocyty to główny typ komórek obecny w naskórku lub najbardziej zewnętrznej warstwie skóry. Aby genetycznie zmodyfikować keratynocyty, zacznij od hodowli retrowirusowych komórek feniksa. Następnie dodać mieszaninę zawierającą wektory retrowirusowe przenoszące gen będący przedmiotem zainteresowania i odczynnik do transfekcji. Inkubuj płytkę przez żądany czas.
Odczynnik do transfekcji ułatwia dostarczanie materiału genetycznego wirusa do komórek pakujących. Te specjalnie zaprojektowane komórki kodują białka niezbędne do produkcji retrowirusowego kapsydu i promują pakowanie retrowirusowego wektora RNA przenoszącego interesujący nas gen. Po zapakowaniu dojrzałe wirusy opuszczają komórki do pożywki. Teraz przenieś pożywkę zawieszoną wirusem do świeżego naczynia hodowlanego zawierającego pierwotne keratynocyty. Rozszerz kulturę za pomocą pożądanego kationowego roztworu polimeru.
Polimer kationowy neutralizuje ładunki ujemne na błonach wirusa i keratynocytów, zwiększając efektywność fuzji wirusa z powierzchnią komórki. Po fuzji wirus uwalnia swoje RNA do cytoplazmy komórki, która ulega odwrotnej transkrypcji na dwuniciowe DNA. To wirusowe DNA dostaje się do jądra i integruje się z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych