Name: Ortotopowy model surowiczego raka jajnika u myszy immunokompetentnych do obrazowania guza in vivo i monitorowania odpowiedzi immunologicznej guza (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-28T17:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Poznaj ortotopowy model surowiczego raka jajnika u myszy immunokompetentnych do obrazowania guza in vivo i badania mikrośrodowiska nowotworowego. Ta metoda umożliwia monitorowanie progresji guza w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Praca ta była finansowana z grantu NIH P01 AI 068730 (SNC, NS), grantu NIH CA016520/ TAPITMAT (NS), prywatnych funduszy fundacji Claneil Foundation (NS), grantu ovarian SPORE dla FCCC i University of Pennsylvania (P50 CA83638) oraz grantu Fox Chase Cancer Center Core Grant (P30 CA06927) (DCC). Autorzy dziękują za doskonałą pomoc techniczną Optical/Bioluminescence Core Facility pod kierownictwem dr. E.J. Delikatnego na University of Pennsylvania, Anthony'emu Secreto ze Stem Cell and Xenograft Core pod kierownictwem dr. G. Danet-Desnoyers w University of Pennsylvania Cancer Center za przeszkolenie SNC w technice wstrzykiwania ortotopowego oraz Denada Dangaj z University of Pennsylvania/ OCRC za pomoc przy operacji.

1. Hodowla komórek
<ol>
<li>Przed wstrzyknięciem ortotopowym hodować komórki MOV1Kat, pochodzące z guzów DR26, w kolbie T175 aż do osiągnięcia 90% konfluencji. Zaplanować użycie od 1 do 5 milionów komórek na jedno wstrzyknięcie, co będzie wymagało 1 lub 2 kolb T175.</li>
<li>W dniu wstrzyknięcia zebrać komórki i określić ich liczbę za pomocą hemocytometru.</li>
<li>Po określeniu stężenia komórek, sfragmentować je poprzez wirowanie przez 5 minut przy 300 X g w temperaturze pokojowej.</li>
<li>Po wirowaniu resuspenderować komórki, aby uzyskać 1 milion komórek w 10 µL sterylnego PBS z 0,002 M EDTA.</li>
</ol>

2. Przed operacją
<ol>
<li>Przed operacją napełnić strzykawkę insulinową o pojemności 3/10 cc 1 milionem komórek MOV1-Kat w 10 µL PBS EDTA.</li>
<li>Przenieść mysz znieczuloną izofluranem na podgrzewaną matę. Nałożyć maść do oczu, aby zapobiec ich wysuszeniu. Następnie bezzwłocznie umieścić głowę zwierzęcia w systemie stożka nosowego podłączonego do waporyzatora izofluranu, aby zapewnić znieczulenie przez cały czas trwania zabiegu.</li>
<li>Po dezynfekcji miejsca wstrzyknięcia gazikami nasączonymi alkoholem, podać podskórnie 5 mg/kg ketoprofenu (lek przeciwbólowy przedoperacyjny) za pomocą strzykawki insulinowej o pojemności 3/10 cc.</li>
<li>Za pomocą trymera ogolić lewą tylną część grzbietu od połączenia piersiowo-lędźwiowego do nasady ogona zwierzęcia. Nałożyć krem do depilacji, aby całkowicie usunąć włosy. Następnie usunąć nadmiar kremu mokrym ręcznikiem papierowym.</li>
<li>Po usunięciu włosów wysterylizować ogoloną okolicę za pomocą powidon-jodu i gazików nasączonych alkoholem. Następnie założyć pole operacyjne wokół miejsca nacięcia.</li>
</ol>

3. Operacja
<ol>
<li>Tuż przed operacją ustaw poziom parownika izofluranu na 1,5%.</li>
<li>Zweryfikuj, czy zwierzę jest całkowicie znieczulone, uciskając poduszkę stopy.</li>
<li>Następnie zlokalizuj śledzionę pod skórą. Za pomocą nożyczek chirurgicznych wykonaj cięcie grzbietowo-boczne o długości 1-2 cm w górnej prawej części śledziony.</li>
<li>Przeprowadź preparację przestrzeni zaotrzewnowej. Widoczna będzie tkanka tłuszczowa otaczająca jajnik myszy. Użyj zakrzywionej pęsety, aby uchwycić i odsłonić poduszkę tłuszczową otaczającą jajnik myszy.</li>
<li>Nawilż narząd kilkoma kroplami sterylnego PBS.</li>
<li>Użyj zakrzywionej pęsety, aby uchwycić, odsunąć... ustawić... a następnie unieruchomić jajnik do iniekcji.</li>
<li>Mocno trzymając jajnik pęsetą, wstrzyknij 10 µL komórek nowotworowych MOV1Kat do jajnika. Pewny chwyt zapobiegnie cofaniu się lub wyciekowi płynu.</li>
<li>Niezwłocznie po iniekcji zwolnij ucisk pęsety. Perforacja w jajniku powinna samoistnie się obkurczyć i zamknąć.</li>
<li>Używając wchłanialnej nici z kwasu poliglikolowego zamocowanej na igle, zamknij ranę w przestrzeni zaotrzewnowej.</li>
<li>Zdejmij zwierzę z maski do znieczulenia.</li>
<li>Naciągnij skórę i zaklej brzegi rany grzbietowo-bocznej kilkoma kroplami kleju tkankowego.</li>
<li>Na koniec podaj zwierzęciu doustnie 100 µL antybiotyku. Następnie umieść je z powrotem w klatce i monitoruj proces wybudzania. Podawaj zwierzęciu antybiotyk w wodzie pitnej przez jeden tydzień.</li>
</ol>

4. Obrazowanie in vivo
<ol>
<li>Tydzień po ortotopowym wstrzyknięciu komórek nowotworowych MOV1Kat wykonaj obrazowanie in vivo. Rozpocznij od przeniesienia myszy znieczulonej izofluranem do komory obrazowania.</li>
<li>Zmniejsz poziom dozowania izofluranu w waporyzatorze do 2%.</li>
<li>Przeprowadź obrazowanie in vivo zgodnie z instrukcjami producenta systemu obrazowania. W tym filmie zostanie użyty system Lumina.</li>
<li>Aby rozpocząć obrazowanie, kliknij ikonę oprogramowania Living Image na pulpicie. Następnie w panelu sterowania akwizycją IVIS (IVIS Acquisition Control Panel) wybierz „Initialize”. Ustawienia instrumentu są analogiczne do ustawień aparatu fotograficznego.</li>
<li>W panelu sterowania akwizycją ustaw parametry akwizycji instrumentu. W przypadku fluorescencji zaznacz „Fluorescent”. Zaznacz pole Photograph, aby wraz z każdym obrazem uzyskać zdjęcie.</li>
<li>Następnie ustaw czas ekspozycji na Auto. W sekcji „Pixel binning or CCD resolution” zaznacz „Medium”. Następnie w sekcji F/stop or aperture zaznacz wartość 2. Dalej wybierz filtr wzbudzenia 535 oraz filtr emisji DsRed.</li>
<li>W sekcji field of view kliknij View B, aby obrazować pojedynczą mysz.</li>
<li>Następnie kliknij acquire, aby rozpocząć akwizycję obrazu.</li>
<li>Po zakończeniu akwizycji obrazu użyj narzędzia Region of Interest (ROI), aby zmierzyć sygnał. Kliknij ikonę pomiaru, aby wyświetlić wartości sygnału i powierzchnię.</li>
<li>Na koniec kliknij „save”, aby zapisać obraz w folderze użytkownika.</li>
<li>Po zapisaniu obrazów przerwij podawanie izofluranu i zwróć mysz do klatki. Mysz powinna obudzić się natychmiast.</li>
</ol>
5. Reprezentatywne wyniki
-Stosując ten protokół, wzrost ortotopowego raka jajnika in vivo można monitorować przez co najmniej 3 tygodnie za pomocą nieinwazyjnej procedury.
<img src="/files/ftp_upload/2146/2146fig1.jpg" alt="Obrazowanie fluorescencyjne gryzoni; układ doświadczalny do analizy optycznego rozkładu biologicznego in vivo." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 1"> 
Rycina 1. Komórki MOV1Kat lub PBS jako kontrolę negatywną wstrzykiwano ortotopowo do jajnika myszy niepredysponowanych do tworzenia nowotworów (odpowiednio zwierzę po prawej i zwierzę po lewej). Obrazowanie in vivo przeprowadzono 2 tygodnie później. Emisję fluorescencji generowaną przez komórki MOV1Kat przeszczepione do jajnika zmierzono i porównano z emisją u myszy z grupy kontrolnej negatywnej.
<img src="/files/ftp_upload/2146/2146fig2.jpg" alt="Obraz mikroskopowy markerów komórkowych w próbce tkanki; uwydatnia barwienie komórkowe w celu lokalizacji białek." data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Przemrożone skrawki guzów jajnika MOV1Kat zostały zabarwione biotynilowanym przeciwciałem mAb anty-CD4, a następnie substratem DAB (ciemnobrązowy) w celu wykrycia limfocytów naciekających guz (czarna strzałka). Komórki poddano przeciwbarwieniu metyl zielenią w celu wizualizacji jąder komórkowych (niebieski). Komórki nowotworowe (czerwone strzałki) różniły się morfologicznie od limfocytów T. Przeszkło przedstawiono w powiększeniu 40x.

<ol><li>Etzioni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+early+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The case for early detection.</a> Nat Rev Cancer. 3, 243-252 (2003).</li>
<li>Sasaroli, D., Coukos, G., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+CA125%3A+the+coming+of+age+of+ovarian+cancer+biomarkers.+Are+we+there+yet%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Medicine%22%5BJournal%5D)">Beyond CA125: the coming of age of ovarian cancer biomarkers. Are we there yet.</a> Future Medicine. 3, 275-288 (2009).</li>
<li>Anderson, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Lead+Time+of+Selected+Ovarian+Cancer+Biomarkers%3A+A+Nested+Case+Control+Study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Assessing Lead Time of Selected Ovarian Cancer Biomarkers: A Nested Case Control Study.</a> J Natl Cancer Inst. 102, 26-38 (2010).</li>
<li>Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+surface+epithelium%3A+biology%2C+endocrinology%2C+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev+22%22%5BJournal%5D)">Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology.</a> Endocr Rev 22. , 255-288 (2001).</li>
<li>Dubeau, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell+of+origin+of+ovarian+epithelial+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Oncol%22%5BJournal%5D)">The cell of origin of ovarian epithelial tumours.</a> Lancet Oncol. 9, 1191-1197 (2008).</li>
<li>Connolly, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mice+chimeric+for+expression+of+the+simian+virus+40+TAg+under+control+of+the+MISIIR+promoter+develop+epithelial+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Female mice chimeric for expression of the simian virus 40 TAg under control of the MISIIR promoter develop epithelial ovarian cancer.</a> Cancer Res. 63, 1389-1397 (2003).</li>
<li>Hensley, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Magnetic+resonance+imaging+for+detection+and+determination+of+tumor+volume+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biol+Ther%22%5BJournal%5D)">Magnetic resonance imaging for detection and determination of tumor volume in a genetically engineered mouse model of ovarian cancer.</a> Cancer Biol Ther. 6, (2007).</li>
<li>Deliolanis, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+the+red-shifted+fluorescent+proteins+in+deep-tissue+molecular+imaging+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Performance of the red-shifted fluorescent proteins in deep-tissue molecular imaging applications.</a> J Biomed Opt. 13, (2008).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+better+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A better fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Trends Biotechnol. 26, (2008).</li>
<li>Shcherbo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((far-red+fluorescent+protein+for+whole-body+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">far-red fluorescent protein for whole-body imaging.</a> Nat Methods. 4, 741-746 (2007).</li>
<li>Fu, X., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+ovarian+carcinoma+metastatic+models+constructed+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+of+histologically-intact+patient+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Human ovarian carcinoma metastatic models constructed in nude mice by orthotopic transplantation of histologically-intact patient specimens.</a> Anticancer Res. 13, 283-286 (1993).</li>
<li>Kiguchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patient-like+orthotopic+implantation+nude+mouse+model+of+highly+metastatic+human+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+experimental+metastasis+16%22%5BJournal%5D)">A patient-like orthotopic implantation nude mouse model of highly metastatic human ovarian cancer.</a> Clinical & experimental metastasis 16. , 751-756 (1998).</li>
<li>Bao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+cancer-specific+gene+expression+by+the+survivin+promoter%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">Activation of cancer-specific gene expression by the survivin promoter.</a> J Natl Cancer Inst. 94, 522-528 (2002).</li>
<li>Connolly, D. C., Hensley, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+and+Transgenic+Mouse+Models+of+Epithelial+Ovarian+Cancer+and+Non+Invasive+Imaging+Modalities+to+Monitor+Ovarian+Tumor+Growth+In+situ+-Applications+in+Evaluating+Novel+Therapeutic+Agents.+Current+Protocols+in+Pharmacology+45%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Xenograft and Transgenic Mouse Models of Epithelial Ovarian Cancer and Non Invasive Imaging Modalities to Monitor Ovarian Tumor Growth In situ -Applications in Evaluating Novel Therapeutic Agents. Current Protocols in Pharmacology 45.</a> , 1-36 Forthcoming.</li>
<li>Milne, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+immune+infiltrates+in+high-grade+serous+ovarian+cancer+reveals+CD20%2C+FoxP3+and+TIA-1+as+positive+prognostic+factors%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of immune infiltrates in high-grade serous ovarian cancer reveals CD20, FoxP3 and TIA-1 as positive prognostic factors.</a> , (2009).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano konfliktów interesów.

Chirurgia i wstrzyknięcia ortotopowe
Ortotopowe wstrzykiwanie do kaleki jajnika wymaga przeszkolenia i precyzji. W związku z tym
<ol>
<li>W przypadku braku doświadczenia chirurgicznego, należy najpierw poćwiczyć na preparatach zwłokowych.</li>
<li>Zaleca się stosowanie samic wieloparnych (po jednym lub dwóch miotach), ponieważ z czasem rozwijają one większe jajniki, co ułatwia wstrzykiwanie i zwiększa przeżywalność w porównaniu z samicami nulliparnymi.</li>
<li>Ze względu na niewielki rozm...

<table><tbody><tr><td>DMEM-GLUTAMAX</td><td>Invitrogen</td><td>10564-011</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14040</td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Lonza Inc.</td><td>17-711E</td><td></td></tr><tr><td>Mata grzewcza</td><td>Deltaphase</td><td>39 DP</td><td></td></tr><tr><td>Gaziki z powidonem</td><td>Dynarex</td><td>1108</td><td></td></tr><tr><td>Gaziki nasączone alkoholem</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>Maść z sztucznymi łzami</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>17845-153</td><td></td></tr><tr><td>Ketoprofen</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strzykawka insulinowa 3cc</td><td>BD Biosciences</td><td>309301</td><td></td></tr><tr><td>Nić z igłą z kwasu poliglikolowego (3/8 19mm)</td><td>Syneture</td><td>9612-31</td><td></td></tr><tr><td>Klej tkankowy</td><td>Vetbond</td><td>3M</td><td></td></tr><tr><td>Vet Bactrim/ zawiesina doustna</td><td>Hi-tech Pharmacal</td><td>840823</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-Lumina</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>J108013</td><td></td></tr><tr><td>Płodowa surowica bydlęca, kwalifikowana</td><td>Invitrogen</td><td>10437036</td><td></td></tr><tr><td>Penicylina/streptomycyna</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Wektor ssaczy TurboFP635</td><td>Evrogen</td><td>FP721</td><td></td></tr><tr><td>Kolby T175</td><td>cellstar</td><td>660-190</td><td></td></tr></tbody></table>

ortotopowy model surowiczego raka jajnika u immunokompetentnych myszy do obrazowania guzów in vivo i monitorowania odpowiedzi immunologicznych guza

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Wstęp: Rak jajnika jest zazwyczaj diagnozowany w stadium zaawansowanym, w którym stosunek zachorowań do zgonów jest wysoki, co sprawia, że pozostaje on najbardziej śmiertelnym z wszystkich nowotworów ginekologicznych wśród kobiet w USA 1,2,3. Guzy surowicze są najczęstszymi postaciami raka jajnika 4,5, a myszy transgeniczne Tg-MISIIR-TAg stanowią jedyny model mysi, w którym ten typ guzów rozwija się spontanicznie. Myszy Tg-MISIIR-TAg wykazują ekspresję regionu transformującego SV40 pod kontrolą promotora genu receptora substancji inhibującej mullerowskiej typu II (MISIIR) 6. Zidentyfikowano dodatkowe linie transgeniczne, które wykazują ekspresję transgenu SV40 TAg, ale nie rozwijają guzów jajnika. Myszy niewrażliwe na powstawanie guzów wykazują typową dla myszy C57Bl/6 długość życia i są płodne. Myszy te mogą być wykorzystywane jako syngeneiczni biorcy allograftów komórek nowotworowych izolowanych z myszy Tg-MISIIR-TAg-DR26.
Cel: Chociaż obrazowanie guzów jest możliwe 7, wczesne wykrywanie głęboko położonych nowotworów u małych żywych zwierząt stanowi wyzwanie. Aby umożliwić badania przedkliniczne w immunologicznie nienaruszonym modelu zwierzęcym raka seryzowego jajnika, opisujemy syngeniczny model mysi dla tego typu raka jajnika, który pozwala na obrazowanie in vivo, badania mikrośrodowiska guza oraz odpowiedzi immunologicznej nowotworu.
Metody: W pierwszej kolejności wyizolowano linię komórkową raka mysiego TAg+ (MOV1) z samoistnego guza jajnika pobranego od 26-tygodniowej samicy DR26 Tg-MISIIR-TAg. Następnie przeprowadzono stabilną transdukcję komórek MOV1 za pomocą ssaczego wektora lentiwirusowego TurboFP635 kodującego Katushkę, dalekoczerwoną mutantkę czerwonego białka fluorescencyjnego z ukwiału Entacmaea quadricolor, z maksimami wzbudzenia/emisji przy 588/635 nm 8,9,10. Komórki MOV1Kat zaimplantowano ortotopowo do jajnika 11,12,13,14 u samic myszy Tg-MISIIR-TAg niewrażliwych na powstawanie guzów. Postęp nowotworowy monitorowano za pomocą obrazowania optycznego in vivo, a mikrośrodowisko guza analizowano metodą immunohistochemii.
Wyniki: Ortotopowo zaimplantowane komórki MOV1Kat rozwinęły surowicze guzy jajnika. Guzy MOV1Kat można było wizualizować za pomocą obrazowania in vivo do trzech tygodni po implantacji (ryc. 1); wykazywały one naciek leukocytów, co obserwuje się w przypadku ludzkich raków jajnika 15 (ryc. 2).
Wnioski: Opisujemy ortotopowy model raka jajnika, który jest odpowiedni do in vivo obrazowanie wczesnych guzów dzięki wysokiej stabilności pH oraz fotostabilności Katushki w głębokich tkankach. Proponujemy wykorzystanie tego nowego syngenicznego modelu surowczego raka jajnika do in vivo badania obrazowe oraz monitorowanie odpowiedzi immunologicznych guza i immunoterapii.

Aby zbadać wzrost guza oraz mikrośrodowisko nowotworowe in vivo, zastosowaliśmy syngeniczny i ortotopowy model raka jajnika u immunokompetentnych myszy. Przetransdukowaliśmy linię komórkową nowotworu mysiego (MOV1) białkiem fluorescencyjnym Katushka (MOV1KAT), a w niniejszej pracy przedstawiamy sposób jej ortotopowej implantacji do jajnika oraz obrazowanie in vivo.

Ortotopowy model surowiczego raka jajnika u immunokompetentnych myszy do obrazowania guzów in vivo i monitorowania odpowiedzi immunologicznych guza

Wstęp: Rak jajnika jest zazwyczaj diagnozowany w zaawansowanym stadium, w którym stosunek zapadalności do śmiertelności jest wysoki, przez co pozostaje on najbardziej śmiertelnym z wszystkich...

Rak jajnika jest zazwyczaj diagnozowany w zaawansowanym stadium, kiedy wskaźnik śmiertelności jest wysoki. W związku z tym rak jajnika pozostaje najbardziej śmiertelnym z wszystkich nowotworów ginekologicznych u kobiet w Stanach Zjednoczonych. W niniejszym opracowaniu opisujemy syngeneiczny model mysi surowiczego raka jajnika, który umożliwia zarówno obrazowanie in vivo, jak i badanie mikrośrodowiska guza.Przeprowadzono stabilną transdukcję białkiem fluorescencyjnym kaka pochodzącym z C nmy oraz linii komórkowej raka jajnika pochodzącej z myszy transgenicznej DR 26 dla MIS two R tag. Komórki te, nazwane MOV one cat, są wstrzykiwane do jajnika niepredysponowanej do nowotworów myszy transgenicznej TG MIS two R tag, aby rosły i rozwijały się w fluorescencyjnego serozalnego raka jajnika. W celu monitorowania progresji guza wykonuje się obrazowanie in vivo.Następnie przeprowadza się sekcję jajnika i wykonuje badania immunohistochemiczne w celu zbadania mikrośrodowiska guza. Ten model zwierzęcy wykazuje trzy główne zalety w porównaniu z istniejącymi modelami genetycznymi. Po pierwsze, u myszy rozwinęły się guzy podobne do ludzkiego raka jajnika typu jasnokomórkowego, który jest najczęsts

an-orthotopic-model-serous-ovarian-cancer-immunocompetent-mice-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Ortotopowity model raka jajnika wydzielającego płyn w przypadku myszy immunokompetentnych do in vivo obrazowania guza i monitorowania odpowiedzi immunologicznych guza

Ortotopowe modele zwierzęce raka jajnika lepiej odwzorowują przebieg choroby u ludzi, a tym samym zwiększają naszą wiedzę na temat progresji nowotworu i odpowiedzi guza na terapię. W modelu mysim wykonuje się wstrzyknięcie do wnętrza woreczka otrzewnej komórek nowotworu jajnika wykazujących ekspresję lucyferazy. Leczenie podaje się poprzez zgłębnik żołądkowy. Wzrost guza monitoruje się za pomocą systemu obrazowania in vivo.

Obrazowanie in vivo i leczenie terapeutyczne w ortotopowym modelu raka jajnika u myszy

Ten film opisuje protokół tworzenia mysiego modelu eksperymentalnego do badania rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej. Ten model raka jajnika jest generowany przez ortotopową inokulację ludzkich komórek nabłonkowego raka jajnika do jajników samicy myszy.

Ortotopowa inokulacja komórek raka jajnika do mysiego jajnika: procedura mająca na celu stworzenie mysiego modelu raka jajnika do badania rozsiewu komórek w otrzewnie

Opisujemy nieinwazyjną platformę obrazowania zwierząt, która pozwala na wykrywanie, kwantyfikację i monitorowanie wzrostu i nawrotów raka jajnika. Ten model ksenoprzeszczepu dootrzewnowego naśladuje profil kliniczny pacjentek z rakiem jajnika.

Mysi model do nieinwazyjnego obrazowania w celu wykrywania i monitorowania nawrotu raka jajnika

Przerzuty raka jajnika charakteryzują się licznymi rozlanymi zmianami wewnątrzotrzewnowymi, tak że dokładne wizualne określenie obciążenia guzem jest trudne.  W niniejszym artykule opisano metodę ilościowego oznaczania obciążenia guzem przerzutowym in situ i ex vivo przy użyciu komórek nowotworowych znakowanych białkiem czerwonej fluorescencji (RFP) i obrazowania optycznego.

Kwantyfikacja przerzutów do raka jajnika do zatrzewnej

Aby wyjaśnić wieloetapowy proces rozprzestrzeniania się raka jajnika w otrzewnej, obecne badanie przedstawia mysi eksperymentalny model pierwotnego rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej poprzez ortotopową inokulację tymi komórkami nowotworowymi.<br...

Mysi eksperymentalny model pierwotnego rozwoju guza i przerzutów do otrzewnej za pomocą ortotopowej inokulacji komórkami raka jajnika

Ten protokół opisuje powstawanie mysich ortotopowych guzów pęcherza moczowego u samic myszy C57BL/6J oraz monitorowanie wzrostu guza.

Mysi ortotopowy model guza pęcherza moczowego i system wykrywania guzów

Obecny protokół opisuje wstrzykiwanie komórek do kostniakomięsaka kości piszczelowej w celu wygenerowania modeli myszy z ortotopowym kostniakomięsakiem i przerzutami do płuc.

Wstrzyknięcie komórek kostniakomięsaka piszczelowego w celu wygenerowania ortotopowego kostniakomięsaka i mysich modeli przerzutów do płuc

Manuskrypt opisuje metodologię ustalania oraz monitorowania wzrostu podłużnego spontanicznych przerzutów do płuc z ortotopowo wstrzykiwanych guzów piersi, które mogą być interwencyjne na wszystkich etapach kaskady przerzutowej.

In vivo (in vivo) Obrazowanie w celu pomiaru spontanicznych przerzutów do płuc komórek guza piersi wstrzykniętych ortotopowo

Ten protokół opisuje ustanowienie trójwymiarowego (3D) modelu ex vivo interakcji komórka rakowa - sieć komórkowa. Model ten stanowi platformę do wyjaśnienia mechanizmów pronowotworowych w niszy tkanki tłuszczowej oraz do testowania nowych terapii.

Model ex vivo przerzutów do otrzewnej raka jajnika z wykorzystaniem ludzkiej sieci

Przedstawiamy tutaj krok po kroku protokół określający modele nowotworów wewnątrzotrzewnowych i wewnątrzburzowych, aby badać postęp raka jajnika, przerzuty oraz odpowiedź terapeutyczną. Ponadto opisujemy, jak stosować nieinwazyjne obrazowanie in vivo oparte na lucyferazzie w tych modelach do monitorowania postępu guza u myszy.

Klinicznie istotne modele nowotworów nadających się do przeszczepiania do badania przerzutowego raka jajnika i odpowiedzi terapeutycznej u myszy

Poznaj ortotopowy model surowiczego raka jajnika u myszy immunokompetentnych do obrazowania guza in vivo i badania mikrośrodowiska nowotworowego. Ta metoda umożliwia monitorowanie progresji guza w czasie rzeczywistym.

Ortotopowy model surowiczego raka jajnika u myszy immunokompetentnych do obrazowania guza in vivo i monitorowania odpowiedzi immunologicznej guza (Wideo) | JoVE Journal

Ortotopowy model surowiczego raka jajnika u immunokompetentnych myszy do obrazowania guzów in vivo i monitorowania odpowiedzi immunologicznych guza

Przeglądaj więcej filmów