Zapalenie otrzewnej wywołane stentem w okrężnicy wstępującej (CASP) – standaryzowany model polimikrobowej sepsy brzusznej

Ogólnym celem niniejszej procedury jest wywołanie sepsy brzusznej poprzez wprowadzenie stentu do okrężnicy wstępującej u myszy. Osiąga się to najpierw poprzez przygotowanie okrężnicy wstępującej. Następnie do okrężnicy wprowadza się przystosowaną kaniulę, a następnie mocuje ją na miejscu.

Na koniec stent zostaje usunięty, a jelito grube przywrócone do jamy otrzewnej. Ostatecznie można uzyskać wyniki wykazujące sepsę poprzez pomiar poziomu cytokin oraz liczby bakterii w osoczu. Główną zaletą tej techniki w porównaniu do istniejących metod, takich jak ligacja i punkcja, jest możliwość miareczkowania stopnia sepsy i śmiertelności poprzez dobór rozmiaru wprowadzanego stentu.

Zazwyczaj osoby rozpoczynające pracę z tą metodą mogą napotkać trudności, ponieważ techniki mikrochirurgiczne wymagają pewnej wprawy. Do czasu osiągnięcia pełnej biegłości, należy rozpocząć od znieczulenia myszy poprzez doszpikowe wstrzyknięcie środka znieczulającego i ułożenia zwierzęcia w pozycji grzbietnej. Stopy myszy należy przymocować taśmą do płytki, aby zapewnić stabilną pozycję zwierzęcia podczas operacji.

Do tej procedury należy przystosować kaniulę do wkłuć dożylnych, powszechnie stosowaną u ludzi, i naciąć jej plastikowe rurki koliście dwa milimetry od końcówki. Po dokładnej dezynfekcji skóry brzusznej myszy należy wykonać nacięcie wzdłuż linii środkowej na długości około 15 milimetrów. Otwórz jamę otrzewną, nacinając mięśnie brzucha oraz otrzewną wzdłuż białej linii brzusznej.

Zidentyfikuj biegun końcowy i za pomocą patyczków bawełnianych ostrożnie wyciągnij z jamy brzusznej końcowe jelito kręte oraz okrężnicę wstępującą. W odległości 15 mm dystalnie od zastawki kątniczo-krętej przebij ścianę okrężnicy wstępującej szwem 7-0. Zwiąż szew na ścianie okrężnicy dwoma węzłami chirurgicznymi.

Nakłuj okrężnicę wstępującą przygotowaną kaniulą. Punkt nakłucia powinien znajdować się jeden do dwóch milimetrów proksymalnie od szwu 7-0. Ostrożnie wprowadź kaniulę do okrężnicy, aż bruzda i plastikowa rurka znajdą się na poziomie cirr.

Wolne końce nici chirurgicznej 7-0 owiń wokół kaniuli, a następnie zawiąż podwójny węzeł dokładnie w przygotowanym rowku plastikowej rurki. Igłą nici 7-0 wykonaj kolejne szwy przez ścianę anty mezeryczną okrężnicy. Zawiąż dwa węzły chirurgiczne, aby dodatkowo przymocować plastikową rurkę do ściany okrężnicy.

Odetnij końce szwów. Delikatnie wysuń metalową część kaniuli i odetnij plastikową rurkę blisko mocującego szwu 7.0. Następnie, używając patyczków bawełnianych, ostrożnie przesuwaj kał z kątnicy w stronę stentu okrężnicy, aż na szczycie stentu pojawi się niewielka ilość treści kałowej.

Wprowadź jelita z powrotem do jamy otrzewnej i przeprowadź resuscytację płynową poprzez podanie dootrzewnowe 0,5 milliliters roztworu soli fizjologicznej. Zamknij otrzewną szwem ciągłym. Zamknij skórę szwami pojedynczymi w celu zapewnienia analgezji.

W razie potrzeby należy podać podskórnie silny środek przeciwbólowy, taki jak buprenorfina, a następnie umieścić zwierzę z powrotem w klatce, w której powinny znajdować się pokarm i woda. Pięć godzin po zabiegu casp przygotować i ponownie zanestezjować mysz w celu przeprowadzenia interwencji operacyjnej. Rozciąć szwy ściany brzusznej.

Ostrożnie wyciągnij wstępnicę z wprowadzonym stentem, przetnij szwy mocujące stent i usuń go. Zamknij ubytek w jelicie grubym za pomocą pojedynczych szwów wywracających. Umieść jelito z powrotem w jamie brzusznej i przepłucz drabinę dwukrotnie pięcioma mililitrami roztworu soli fizjologicznej.

Zamknij otrzewną za pomocą szwu ciągłego. Zamknij skórę pojedynczymi szwami w celu zapewnienia analgezji. Regularnie podawaj podskórnie silny środek przeciwbólowy.

Umieść zwierzę z powrotem w klatce z obfitą ilością pokarmu i wody w ciągu pierwszych dwóch dni po operacji. Monitoruj zwierzęta co sześć godzin w ciągu kilku godzin po operacji CASP; zwierzęta wykazują objawy kliniczne początków sepsy. Wskaźniki przeżywalności po zabiegu CASP zależą od średnicy wszczepionego stentu. CASP z kaniulą 14 G skutkuje 100% śmiertelnością, CASP z kaniulą 16 G skutkuje 70% śmiertelnością, a CASP z kaniulą 18 G prowadzi do 50% śmiertelności.

Grupa kontrolna (sham CASP) charakteryzuje się 100% przeżywalnością. Wynik CASP zależy od czasu trwania zabiegu. Po CASP, w przypadku usunięcia stentu, interwencja przeprowadzona trzy godziny po CSP skutkuje przeżywalnością na poziomie 45%. Jeśli stent zostanie usunięty pięć godzin po csp, procedurę przeżywa jedynie 10% zwierząt. Usunięcie stentu po dziewięciu godzinach skutkuje 100% śmiertelnością. Procedura sham CASP prowadzi do 100% przeżywalności.

Makroskopowa ocena miejsca w jamie brzusznej 24 godziny po CSP wykazuje typowe objawy zapalenia otrzewnej, obrzęk, rozszerzenie naczyń krwionośnych, przekrwienie, wyraźne odgraniczenie ognisk zapalnych na ścianie jelita, porażenie jelit, wolny płyn oraz wydzielinę ropną. Zakażenie systemowe można potwierdzić za pomocą analizy bakteriologicznej 12 godzin po CSP. Masywne ilości bakterii można wykryć w płukankach z otrzewnej, krwi, wątrobie, płucach, śledzionie i nerkach.

Sepsa wywołana przez CSP objawia się miejscowym oraz systemowym uwalnianiem cytokin i chemokin prozapalnych oraz przeciwzapalnych. 12 godzin po CSP, znaczące ilości TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1 i innych można zmierzyć metodą ELISA we krwi, a także w nadsączach zawiesin narządowych, takich jak wątroba, płuca, śledziona i nerki. Po opanowaniu tej techniki, jej wykonanie zajmuje 10 minut, jeśli jest przeprowadzana prawidłowo.

Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać gruntowną wiedzę na temat generowania sepsy brzusznej w modelach SSP oraz SSP z interwencją. To wszystko. Dziękujemy za uwagę i życzymy powodzenia w przeprowadzaniu eksperymentów.