Name: Kompleksowe i efektywne kosztowo monitorowanie laboratoryjne HIV/AIDS: afrykański wzór do naśladowania (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 56 s
Description: Poznaj metodę cytometrii przepływowej do monitorowania terapii antyretrowirusowej HIV w warunkach ograniczonych zasobów. To kompleksowe podejście poprawia diagnostykę i opiekę nad pacjentami w RPA.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Szczególne podziękowania należą się National Health Laboratory Service (NHLS) Republiki RPA za krajową organizację usług diagnostyki przepływowej związanej z HIV (http:\\www.nhls.ac.za oraz http://www.plgcd4.net). Przedstawione badania zostały przeprowadzone w Departamencie Hematologii i Medycyny Molekularnej na Uniwersytecie Witwatersrand (Johannesburg, RPA; przy wsparciu kierownika departamentu, profesor Wendy Stevens). Autorzy nie otrzymali żadnego wsparcia grantowego na tę publikację od firm komercyjnych ani agencji finansujących. Wyrażone opinie należą do autorów i niekoniecznie odzwierciedlają poglądy Uniwersytetu Witwatersrand lub południowoafrykańskiego NHLS.

<ol><li>UNAIDS Report on the global HIV/AIDS epidemic. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.unaids.org/en/ KnowledgeCentre/HIVData/GlobalReport/2008/2008_Global_report.asp">http://www.unaids.org/en/ KnowledgeCentre/HIVData/GlobalReport/2008/2008_Global_report.asp</a> (2008).</li>
<li>World Health Organization Rapid advice: Antiretroviral therapy for HIV infection in adults and adolescents. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/hiv/pub/arv/rapid_advice_art.pdf">http://www.who.int/hiv/pub/arv/rapid_advice_art.pdf</a> (2009).</li>
<li>Mugyenyi, P. DART Trial Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Routine+versus+clinically+driven+laboratory+monitoring+of+HIV+antiretroviral+therapy+in+Africa+%28DART%29%3A+a+randomized+non-inferiority+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Routine versus clinically driven laboratory monitoring of HIV antiretroviral therapy in Africa (DART): a randomized non-inferiority trial.</a> Lancet. 375, 123-131 (2009).</li>
<li>Donnell, D., Kiarie, J., Thomas, K., Baeten, J., Lingappa, J., Cohen, C., Celum, C. ART and risk of heterosexual HIV-1 transmission in HIV-1 serodiscordant African couples: A Multinational Prospective Study. 17th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections, , (2010).</li>
<li>Montaner, J., Wood, E., Kerr, T., Yip, B., Lima, V., Shannon, K., Harrigan, R., Hogg, R. Association of Expanded HAART Coverage with a Decrease in New HIV Diagnoses, Particularly among Injection Drug Users in British Columbia, Canada. 17th Conference on Retroviruses and Opportunistic Infections, , (2010).</li>
<li>Petti, C. A., Polage, C. R., Quinn, T. C., Ronald, A. R., Sande, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+medicine+in+Africa%3A+a+barrier+to+effective+health+care%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Laboratory medicine in Africa: a barrier to effective health care.</a> Clin Infect Dis. 42, 377-382 (2006).</li>
<li>Brown, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+health%3A+Great+expectations%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Global health: Great expectations.</a> BMJ. 334, 874-876 (2007).</li>
<li>Crisp, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+the+World+Upside+Down%5BTitle%5D)+AND+%22Royal+Society+of+Medicine+Press%22%5BJournal%5D)">Turning the World Upside Down.</a> Royal Society of Medicine Press. , (2009).</li>
<li>Hecht, R., Bollinger, L., Stover, J., McGreevey, W., Muhib, F., Madavo, C. E., de Ferranti, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+choices+in+financing+the+response+to+the+global+HIV%2FAIDS+pandemic%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Aff%22%5BJournal%5D)">Critical choices in financing the response to the global HIV/AIDS pandemic.</a> Health Aff. 28, 1591-1605 (2009).</li>
<li>Lawrie, D., Coetzee, L. M., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+continuous+quality+control+incorporating+sample-to+sample+assessment+of+optical+alignment%2C+fluorescence+sensitivity+and+volumetric+operation+fo+flow+cytometers%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">A model for continuous quality control incorporating sample-to sample assessment of optical alignment, fluorescence sensitivity and volumetric operation fo flow cytometers.</a> Cytometry B Clin Cytom. 78, 201-208 (2010).</li>
<li>Loken, M. R., Brosnan, J. M., Bach, B. A., Ault, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+optimal+lymphocyte+gates+for+immunophenotyping+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Establishing optimal lymphocyte gates for immunophenotyping by flow cytometry.</a> Cytometry. 11, 453-459 (1990).</li>
<li>Glencross, D., Scott, L. E., Jani, I. V., Barnett, D., Janossy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD45-assisted+PanLeucogating+for+accurate%2C+cost-effective+dual-platform+CD4%2B+T-cell+enumeration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">CD45-assisted PanLeucogating for accurate, cost-effective dual-platform CD4+ T-cell enumeration.</a> Cytometry. 50, 69-77 (2002).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Aggett, H. M., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+affordable+PanLeucogated+CD4%2B+testing+with+proactive+internal+and+external+quality+assessment%3A+in+support+of+the+South+African+national+comprehensive+care%2C+treatment+and+management+programme+for+HIV+and+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Large-scale affordable PanLeucogated CD4+ testing with proactive internal and external quality assessment: in support of the South African national comprehensive care, treatment and management programme for HIV and AIDS.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S40-S51 (2008).</li>
<li>Dalgleish, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CD4+%28T4%29+antigen+is+an+essential+component+of+the+receptor+for+the+AIDS+retrovirus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The CD4 (T4) antigen is an essential component of the receptor for the AIDS retrovirus.</a> Nature. 312, 763-767 (1984).</li>
<li>Liu, Z., Cumberland, W. G., Hultin, L. E., Prince, H. E., Detels, R., Giorgi, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+CD38+antigen+expression+on+CD8%2B+T+cells+is+a+stronger+marker+for+the+risk+of+chronic+HIV+disease+progression+to+AIDS+and+death+in+the+Multicenter+AIDS+Cohort+Study+than+CD4%2B+cell+count%5BTitle%5D)+AND+%22J+Acquir+Immune+Defic+Syndr+Hum+Retrovirol%22%5BJournal%5D)">Elevated CD38 antigen expression on CD8+ T cells is a stronger marker for the risk of chronic HIV disease progression to AIDS and death in the Multicenter AIDS Cohort Study than CD4+ cell count.</a> J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 16, 83-92 (1997).</li>
<li>Glencross, D. K., Janossy, G., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Scott, L. E., Sanne, I., McIntyre, J. A., Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2FCD38+activation+yields+important+clinical+information+of+effective+antiretroviral+therapy%3A+findings+from+the+first+year+of+the+CIPRA-SA+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">CD8/CD38 activation yields important clinical information of effective antiretroviral therapy: findings from the first year of the CIPRA-SA cohort.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S131-S140 (2008).</li>
<li>Coetzee, L. M., Tay, S. S., Lawrie, D., Janossy, G., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+research+tool+to+routine+test%3A+CD38+monitoring+in+HIV+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">From research tool to routine test: CD38 monitoring in HIV patients.</a> Cytometry B Clin Cytom. 76, 375-384 (2009).</li>
<li>Larsen, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fragile+environments+of+inexpensive+CD4%2B+T-cell+enumeration+in+the+least+developed+countries%3A+strategies+for+accessible+support%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">The fragile environments of inexpensive CD4+ T-cell enumeration in the least developed countries: strategies for accessible support.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S107-S116 (2008).</li>
<li>Glencross, D. K., Coetzee, L. M., Lawrie, D., Sanne, I., McIntyre, J. A., Janossy, G., Stevens, W. Longitudinal monitoring of CD38 activation can obviate costly viral load testing in 60% of patients on ART. 11th IUSTI World Congress, , (2009).</li>
<li>Bergeron, M., Lustyik, G., Phaneuf, S., Ding, T., Nicholson, J. K., Janossy, G., Shapiro, H., Barnett, D., Mandy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stability+of+currently+used+cytometers+facilitates+the+identification+of+pipetting+errors+and+their+volumetric+operation%3A+%22time%22+can+tell+all%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Stability of currently used cytometers facilitates the identification of pipetting errors and their volumetric operation: "time" can tell all.</a> Cytometry B Clin Cytom. 52, 37-39 (2003).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow+Cytometer+Alignment+Verification+Package+insert+of+Flow-CheckTM+Fluorospheres.+Volume+PN+4276179-LA%22">Flow Cytometer Alignment Verification Package insert of Flow-CheckTM Fluorospheres. Volume PN 4276179-LA</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2008).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow-SetTM+Fluorospheres+%28Flow+Cytometer+Standardization+Fluorospheres%29.+Package+insert+of+Flow-SetTM+Fluorospheres.+Volume+PN+6607007%22">Flow-SetTM Fluorospheres (Flow Cytometer Standardization Fluorospheres). Package insert of Flow-SetTM Fluorospheres. Volume PN 6607007</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Immuno-TrolTM+Cells.+Package+insert+of+Immuno-TrolTM+Cells.+Volume+PN+6607077%22">Immuno-TrolTM Cells. Package insert of Immuno-TrolTM Cells. Volume PN 6607077</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
<li>Beckman Coulter Hematology IQAP program. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/wsr/support/quality-assurance-programs/interlaboratory-quality-assurance-program-iqap/index.htm">https://www.beckmancoulter.com/wsrportal/wsr/support/quality-assurance-programs/interlaboratory-quality-assurance-program-iqap/index.htm</a> (2009).</li>
<li>UKNEQAS. United Kingdom National External Quality Assessment Service. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.ukneqas.org.uk">http://www.ukneqas.org.uk</a> (2009).</li>
<li>Glencross, D. K., Aggett, H. M., Stevens, W. S., Mandy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((African+regional+external+quality+assessment+for+CD4+T-cell+enumeration%3A+development%2C+outcomes%2C+and+performance+of+laboratories%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">African regional external quality assessment for CD4 T-cell enumeration: development, outcomes, and performance of laboratories.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S69-S79 (2008).</li>
<li>Tilling, R., Kinloch, S., Goh, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+decline+of+CD8%2B%2FCD38%2B%2B+T+cells+and+viraemia+in+response+to+quadruple+highly+active+antiretroviral+therapy+in+primary+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22AIDS%22%5BJournal%5D)">Parallel decline of CD8+/CD38++ T cells and viraemia in response to quadruple highly active antiretroviral therapy in primary HIV infection.</a> AIDS. 16, 589-596 (2002).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22FLOWCARETM+PLG+CD4+Reagent+%28CD45-FITC%2FCD4-PE%29.+Package+insert+of+FLOWCARETM+PLG+CD4+Reagent%22">FLOWCARETM PLG CD4 Reagent (CD45-FITC/CD4-PE). Package insert of FLOWCARETM PLG CD4 Reagent</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2004).</li>
<li>Coulter, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCoulter%2C+B+%22Flow-CountTM+Fluorospheres.+PN+7507992-M%22">Flow-CountTM Fluorospheres. PN 7507992-M</a>. , Beckman Coulter USA. Galway. (2007).</li>
<li>Scott, L. E., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+reproducibility+of+single+analysis%2C+single+platform+CD4+cell+counts+in+a+high+volume%2C+low+resource+laboratory+setting+using+sequential+bead+count+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Monitoring reproducibility of single analysis, single platform CD4 cell counts in a high volume, low resource laboratory setting using sequential bead count rates.</a> Cytometry B Clin Cytom. 67, 31-32 (2005).</li>
<li>Storie, I., Sawle, A., Goodfellow, K., Whitby, L., Granger, V., Reilly, J. T., Barnett, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+rate+calibration%3A+a+new+approach+for+performing+absolute+cell+counts%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Flow rate calibration: a new approach for performing absolute cell counts.</a> Cytometry B Clin Cytom. 55, 1-7 (2003).</li>
<li>Coetzee, L., Lawrie, D., Stevens, W., Glencross, D. K. Evaluation of pipetting methodology to assess precision and accuracy of single platform PLG/CD4 enumeration. 2nd SA-AIDS Congress, Durban, South Africa, , (2006).</li>
<li>NHLS Training Manual, PLG/CD4 Workshop. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.plgcd4.net/">http://www.plgcd4.net/</a> (2008).</li>
<li>Borowitz, M. J., Guenther, K. L., Shults, K. E., Stelzer, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunophenotyping+of+acute+leukemia+by+flow+cytometric+analysis.+Use+of+CD45+and+right-angle+light+scatter+to+gate+on+leukemic+blasts+in+three-color+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunophenotyping of acute leukemia by flow cytometric analysis. Use of CD45 and right-angle light scatter to gate on leukemic blasts in three-color analysis.</a> Am J Clin Pathol. 100, 534-540 (1993).</li>
<li>Mokone, G. N., Lawrie, D., Coetzee, L., Glencross, D. K. Interpretation of CD45 patterns in the PanLeucoGating CD4 test can be used for diagnosis of white cell abnormalities. Poster presentation. , (2007).</li>
<li>Lawrie, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+wide-spread+clinical+uses+of+PanLeucoGating+technology+in+the+HIV+diagnosis+oriented+immunohaematology+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22PhD+Thesis%2C+in+preparation%22%5BJournal%5D)">The wide-spread clinical uses of PanLeucoGating technology in the HIV diagnosis oriented immunohaematology laboratory.</a> PhD Thesis, in preparation. , (2010).</li>
<li>Badri, M., Lawn, S. D., Wood, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+CD4+cell+counts+for+early+prediction+of+virological+failure+during+antiretroviral+therapy+in+a+resource-limited+setting%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Utility of CD4 cell counts for early prediction of virological failure during antiretroviral therapy in a resource-limited setting.</a> BMC Infect Dis. 8, 89(2008).</li>
<li>Peter, T., Badrichani, A., Wu, E., Freeman, R., Ncube, B., Ariki, F., Daily, J., Shimada, Y., Murtagh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+implementing+CD4+testing+in+resource-limited+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">Challenges in implementing CD4 testing in resource-limited settings.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S123-S130 (2008).</li>
<li>Denny, T. N., Gelman, R., Bergeron, M., Landay, A., Lam, L., Louzao, R., Mandy, F. F., Schmitz, J., Spira, T., Wilkening, C., Glencross, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+North+American+multilaboratory+study+of+CD4+counts+using+flow+cytometric+panLeukogating+%28PLG%29%3A+a+NIAID-DAIDS+Immunology+Quality+Assessment+Program+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+B+Clin+Cytom%22%5BJournal%5D)">A North American multilaboratory study of CD4 counts using flow cytometric panLeukogating (PLG): a NIAID-DAIDS Immunology Quality Assessment Program Study.</a> Cytometry B Clin Cytom. 74, Suppl 1. S52-S64 (2008).</li>
<li>Janossy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+pattern+of+%22smart%22+flow+cytometry+%28S-FC%29+to+assist+the+cost-effective+diagnosis+of+HIV%2C+tuberculosis%2C+and+leukemias+in+resource-restricted+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+J%22%5BJournal%5D)">The changing pattern of "smart" flow cytometry (S-FC) to assist the cost-effective diagnosis of HIV, tuberculosis, and leukemias in resource-restricted conditions.</a> Biotechnol J. 3, 32-42 (2008).</li>
</ol>

Międzynarodowe prawa patentowe do opisanej tutaj metody oznaczania CD4 należą do południowoafrykańskiego NHLS i są obecnie licencjonowane dla firmy BCI z Miami, Fl, USA.

W ostatnich latach programy finansowane przez organizacje charytatywne i z dotacji pomogły w ustanowieniu doskonałych praktyk klinicznych w regionach świata o ograniczonych zasobach, charakteryzujących się dużym obciążeniem zakażeniami HIV. Programy ART odniosły sukces w redukcji śmiertelności i są obecnie wdrażane przy wyższych wartościach CD4 2,3. Już teraz istnieją przesłanki, że te nowe środki ograniczą rozprzestrzenianie się zakażeń HIV 4,5, mimo braku swoistej szczepionki przeciwko HIV. W naszym filmie dokumentujemy, że podczas monitorowania pacjentów w ramach ART techniki te mogą być lepiej ukierunkowane i stać się bardziej efektywne kosztowo niż te obserwowane w rutynowej praktyce stosowanej w laboratoriach zachodnich (Lista 1).
Taki model prowadzony przez kraje afrykańskie może okazać się niezbędny dla wsparcia modernizacji usług laboratoryjnych w czasie, gdy zakażenie HIV, leczone za pomocą ART, staje się chorobą przewlekłą. Taki monitoring ART wymaga precyzyjnego liczenia limfocytów CD4 oraz technologii monitorowania ładunku wirusowego, co jest zadaniem bardziej wymagającym niż zwykłe oznaczenie liczby CD4 w celu przypisania pacjentów do dowolnych grup pomocniczych przy podejmowaniu decyzji o rozpoczęciu ART 16. Dzięki zastosowaniu tej diagnostyki, tj. testu CD8/CD38, możliwe jest zmniejszenie kosztów monitorowania VL u &gt;60% pacjentów przyjmujących ART 16,19. Należy również podkreślić, że to test CD8/CD38 16,17, a nie liczenie CD4 37, pozwala prawdopodobnie na wcześniejsze wykrycie oznak nawrotu VL i/lub braku przestrzegania zaleceń terapeutycznych przez pacjenta w zakresie przyjmowania leków.
Kluczowym elementem skoordynowanej, efektywnej kosztowo usługi centralnej jest dostępność rozległej sieci krajowej lub regionalnej, wspieranej przez ekspertów i doradców akademickich, którzy znają techniczne i medyczne aspekty funkcjonowania takiej sieci. Świadczą o tym działania sieci NHLS w RPA oraz programy szkoleniowe CD4-PLG.net 33, 36, które zapewniają wsparcie, edukację i ocenę jakości dla mniejszych ośrodków, co może obejmować również usługi typu „point-of-care”.
Ważne jest, aby działalność laboratoriów centralnych i laboratoriów w punkcie opieki (point-of-care) była komplementarna. Podczas gdy pierwsze pełnią podwójną rolę, zapewniając kosztowo efektywną operację usługową na dużą skalę oraz podstawowe i zaawansowane szkolenia dla laboratoriów peryferyjnych 33,38, drugie przyczyniają się do zwiększenia zasięgu ART poprzez rekrutację pacjentów HIV+ kwalifikujących się do ART z szerszej bazy, w tym z klinik wiejskich. Należy tutaj zachować ostrożność, ponieważ diagnostyka w punkcie opieki może być znacznie droższa i nie gwarantuje automatycznie dokładności 38. Rozsądne jest zatem utrzymanie dwustopniowego systemu i ułatwienie koordynacji między tymi dwoma poziomami, bez dopuszczania do zaniku któregokolwiek z nich.
Podsumowując, w dziedzinie monitorowania diagnostycznego w ramach klinicznego leczenia chorób zakaźnych, niezbędne oszczędności kosztów można osiągnąć dzięki odpowiednim usługom wykorzystującym tańszą i lepiej skoordynowaną nowoczesną technologię o znacznie poprawionej jakości 13,39. Dobrze zorganizowane krajowe (i regionalne) świadczenia usług diagnostycznych powinny być lepiej wspierane 6-8 poprzez unikanie scenariusza, w którym niemal cały fundusz grantowy jest marnowany na drogie i/lub niesprawdzone metody, gdy tylko zostaną one zaimportowane z krajów bogatych bez uprzedniej, starannej i konstruktywnej analizy. Podobnie, bardziej elastyczny projekt klinicznych badań terapeutycznych z pełnym zaangażowaniem lokalnych lekarzy i personelu medycznego powinien prowadzić do ograniczenia niepotrzebnie częstych i/lub zbyt ambitnych testów laboratoryjnych 3. Taka polityka dałaby większą szansę na pełniejsze wykorzystanie dostępnych, dokładnych wyników diagnostycznych w skoordynowanej ocenie kliniczno-laboratoryjnej pacjentów przyjmujących ART. Te inteligentne metody diagnostyczne mogłyby zostać wprowadzone jako pionierskie w krajach o ograniczonych zasobach 8 w obszarach gruźlicy i białaczek, z wykorzystaniem istniejącej, znanej platformy cytometrii przepływowej 40.

kompleksowy i efektywny kosztowo monitoring laboratoryjny hiv/aids: afrykański wzór do naśladowania

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Prezentujemy film dotyczący wspierania terapii antyretrowirusowej (ART) przez odpowiednie usługi laboratoryjne, stanowiące południowoafrykański wzorzec ekonomicznego, wielkoskalowego testowania diagnostycznego. W krajach o niskich dochodach niedroga terapia ART zmieniła perspektywy przeżycia pacjentów seropozytywnych w kierunku HIV, jednak istnieją wątpliwości, czy istnieje potrzeba laboratoryjnego monitorowania ART i jakim kosztem – zwłaszcza w sytuacjach, gdy ogólna jakość usług patomorfologicznych wciąż może być bardzo niska. Odpowiedzią jest ustanowienie ekonomicznie uzasadnionych usług z lepszą koordynacją i surowszą wewnętrzną oceną jakości, niż ma to miejsce w krajach zachodnich. Film ten, zrealizowany w Narodowej Służbie Laboratoriów Zdrowia (NHLS-SA) na Uniwersytecie Witwatersrand w Johannesburgu w RPA, przedstawia taki skoordynowany schemat, rozszerzający oryginalną dwukolorową strategię bramkowania PanLeucoGating (PLG) dla CD4-CD45. Sześć modułów prezentacji wideo ukazuje prostotę 4-kolorowego badania cytometrycznego, które pozwala połączyć testy hematologiczne, immunologiczne i wirusologiczne w jednej probówce. Moduły wideo obejmują: (i) konfigurację instrumentów; (ii) przygotowanie próbek; (iii) oznaczanie liczby bezwzględnej i monitorowanie jakości każdej próbki za pomocą szybkości zliczania kulek (bead-count-rate); (iv) hematologiczny test CD45 w celu oznaczenia liczby i rozkładu leukocytów; (v) liczbę komórek CD4 oraz (vi) aktywację limfocytów T CD8+ mierzoną ekspresją CD38, będącą parametrem powiązanym z wiremią. Potencjalne oszczędności kosztów są znaczące. Taki układ jest doskonałym przykładem możliwości wykonywania &gt; 800-1000 testów dziennie przy surowszej kontroli jakości niż stosowana w laboratoriach zachodnich, a także z transferem technologii do innych laboratoriów w ramach sieci NHLS-SA. Eksperci, kierownicy laboratoriów i decydenci odpowiedzialni za wprowadzanie nowoczesnych technologii medycznych często nie mają możliwości zapoznania się z najnowszymi szczegółami technicznymi wdrażanymi w dużych laboratoriach regionalnych przy ogromnym obciążeniu pracą. Dlatego niniejszy film przedstawia szczegóły tych nowych rozwiązań.

Terapia antyretrowirusowa w leczeniu HIV/AIDS jest monitorowana na szeroką skalę w RPA. Cytometria przepływowa jest łączona z badaniami hematologicznymi (CD45), immunologicznymi (CD4) oraz analizą CD38 powiązaną z wiremią. Metody te, zarejestrowane w laboratoriach NHLS-SA w Johannesburgu, są nowoczesne, kostu-efektywne i charakteryzują się wzmocnioną lokalną kontrolą jakości, stanowiąc wzór dla diagnostyki w warunkach ograniczonych zasobów.

Kompleksowy i efektywny kosztowo monitoring laboratoryjny HIV/AIDS: afrykański wzór do naśladowania

Prezentujemy materiał wideo na temat wspierania terapii antyretrowirusowej (ART) poprzez odpowiednie usługi laboratoryjne, stanowiący południowoafrykański wzorzec ekonomicznego...

Przeciwciało monoklonalne wykorzystywane w tych analizach jest określane jako CD4. Jest to podstawowy odczynnik służący do wykrywania limfocytów T pomocniczych. Służy on do pomiaru liczby limfocytów CD4-dodatnich we krwi, które są stopniowo niszczone przez HIV.W ten sposób liczba komórek CD4 jest powiązana z niedoborem odporności u pacjenta. Inny odczynnik, CD45, jest wykorzystywany do zliczania wszystkich białych krwinek, co stanowi kolejny przydatny test rutynowy. Dodatkowe badanie tzw. markerów aktywacji pozwala obniżyć koszty oznaczeń wiremii, które mogą być bardzo wysokie.Badania te zostały przeprowadzone na Uniwersytecie Witwatersrand w Johannesburgu w RPA pod kierownictwem profesor Deborah Glen Cross i profesor Wendy Stevens. Cel niniejszego filmu jest dwójką. W pierwszej części zaprezentowano, w jaki sposób w dobrze wyposażonym laboratorium przeprowadza się analizy dotyczące liczby CD4, CD45 oraz wiremii.Materiał ten składa się z sześciu modułów. Opisane kroki techniczne są następnie wdrażane w 70 laboratoriach na terenie całej RPA. W drugiej części omówiono relację pomiędzy dużym laboratorium centralnym, w którym każdego dnia wykonuje się tysiące testów, a laboratoriami peryferyjnymi, znajdującymi się bliżej miejsca opieki nad pacjentami.Dyskusja koncentruje się tutaj na tym, jak ułatwić wsparcie w leczeniu większej liczby pacjentów zakażonych HIV lekami antyretrowirusowymi. Nazywam się Neil Ney. Pracuję jako sekretarz.Jestem technologiem cytometrii przepływowej. Pracuję w General Hospital w Johannesburgu w RPA. Jest to cykl przepływowy.W tym przypadku wykorzystujemy cytometrię przepływową marki Beckman. W zasadzie to, co się dzieje, to praca biblioteki w rytmie odpadów.Wykonywamy czynności codziennie, takie jak uruchamianie liczników komórek oraz sprawdzanie instrumentów do analizy przepływowej. Są również zadania, które wykonujemy co tydzień, na przykład archiwizację wyników. Niektóre prace wykonujemy raz w miesiącu, jak na przykład konserwację.Po zakończeniu cyklu czyszczenia inicjujemy urządzenie. Naciskamy przycisk start. Uruchamiamy dwie próbki kontrolne, dwie probówki z ostrzami lub można uruchomić dwie probówki z roztworem głównym i dwie z wodą destylowaną.Po zakończeniu wszystkich prac czyszczących w pierwszej kolejności wykonujemy kontrolę poziomu (floor check), aby sprawdzić wyrównanie lasera oraz monitorować napięcie, upewniając się, że pozostaje ono stałe. Jeśli kontrola poziomu wykonana rano zakończy się niepowodzeniem, należy ją powtórzyć. W przypadku dalszych problemów konieczne jest wezwanie głównego serwisu FA emissions w celu przeglądu urządzenia.ponieważ może występować problem z wyrównaniem lasera lub napięciami. Każdego ranka przeprowadzamy próby immunoanalityczne, zarówno standardowe, jak i o wysokim stężeniu. Mogą być one wykonywane co najmniej raz w ciągu ośmiogodzinnej zmiany.Przystępujemy teraz do wysokowydajnej immuno-CHO. Sprawdzę, czy liczba naszych komórek mieści się w zakładanych zakresach. Nazywam się Denise Dory.Jestem kierownikiem laboratorium miejskiego w szpitalu w Johannesburgu, pełniąc w tym zakresie funkcję krajową. Byłam zaangażowana w opracowywanie procedur zapewnienia jakości w celu zagwarantowania dokładności i powtarzalności oznaczeń liczby CD4, nie tylko w naszym laboratorium, ale w całej RPA.Przygotowanie czterech próbek CD4 jest bardzo proste. Używamy dwóch przeciwciał monoklonalnych o różnych kolorach, CD4 oraz CD45. Zazwyczaj są one dostarczane w formie gotowej mieszaniny w jednej brązowej butelce zawierającej oba przeciwciała.Na początek przygotowano 10 µL przeciwciała CD 45 CD cztery na dnie czystej probówki. Następnie w kolejnym kroku należy dodać krew. W tej metodzie zastosowano 100 µL krwi.Musi zostać przygotowana z dokładnością. Następnie krew i przeciwciała należy ze sobą zmieszać. Ostatnim etapem tego przygotowania będzie dodanie odczynnika antyglobulinowego.Jak widać, po dodaniu odczynnika LY krew zmienia się z mętnego roztworu w roztwór hemolizowany, przez który można przejrzeć probówkę. Jest to bardzo prosta metoda, którą można wykonać ręcznie, jednak w przypadku przetwarzania dużych partii próbek, co ma miejsce w większości laboratoriów, należy użyć systemu zautomatyzowanego, takiego jak ten, który wykona przygotowanie probówki za nas. Przygotowanie nie musi być jednak koniecznie wykonywane przez system zautomatyzowany, jeśli stosuje się licznik kulek (beads), ponieważ dodane kulki poinformują nas, czy próbka została przygotowana prawidłowo.Ostatnim etapem przed umieszczeniem próbki w analizatorze jest dodanie 100 µL kulek, które znajdują się w takiej probówce. Próbka będzie wówczas gotowa do załadowania do cytometru przepływowego. Nazywam się sit MoFA, jestem inspektorem ds. zapewnienia jakości w tym laboratorium cytometrii przepływowej i pasjonuję się cytometrią przepływową.Dysponujemy tutaj bardzo nowoczesnymi urządzeniami, mianowicie systemami epics excels, które są bardzo stabilne. W rzeczywistości dodajemy nasze koraliki, które również potwierdzają stabilność instrumentów. Zatem w jaki sposób monitorujemy szybkość zliczania przepływu?Niska częstotliwość zliczeń zależy przede wszystkim od zespołu. W ostatnim czasie wprowadziliśmy zautomatyzowane przygotowanie instrumentów oraz próbek, jednak monitorowanie częstotliwości przepływu i zliczeń wciąż pozostaje istotną kontrolą jakości (QC). Nasze zliczenia przepływu wykazują linię prostą, co świadczy o doskonałej stałości częstotliwości zliczeń, jednak nadal pozostają one kluczowe.Wciąż występują niektóre wartości odstające, które mogą być spowodowane błędem pipetowania. Jeśli jednak wykluczymy możliwość błędu pipetowania, możemy sprawdzić, czy nasz instrument działa prawidłowo, a następnie wezwać inżynierów do naprawy urządzenia, aby mogło ono wrócić do użytku. To jest Zo ly z firmy Beckman Ter. Jest on naszym technikiem.Przychodzę za każdym razem, gdy pojawia się problem, a także co sześć miesięcy w celu przeprowadzenia konserwacji, ponieważ nasze próbki są analizowane za pomocą tych instrumentów. Jako specjalista ds. QA moim obowiązkiem jest stałe monitorowanie tego ekranu, który kontroluje szybkość przepływu zliczeń. Dzięki temu natychmiast zauważam każdą wartość odstającą.Widzę, że występuje wartość odstająca. W tej chwili pracuje pięć instrumentów, ponieważ nasze obciążenie pracą jest niezwykle wysokie, a te dwa tutaj pokazują, że nie chodzi o analizowane próbki. Jest to jedynie etap, który wykonujemy na końcu każdego karuzeli, ale wciąż dostrzegamy pewne wartości odstające.Na przykład w przypadku tego urządzenia, którym jest Epic Excel four. Ten element zdecydowanie wymaga natychmiastowej naprawy przed wysłaniem wyników z całego karuzeli, a po zresetowaniu musi zostać niezwłocznie uruchomiony przed kalibracją. Podsumowując, ustaliliśmy, że nasze urządzenia działają optymalnie.Sprawdziliśmy powtarzalność liczenia kulek, aby upewnić się, że następujące po tym pomiary CD4 będą dokładne. Zweryfikowaliśmy prawidłowe ustawienie laserów w naszych instrumentach oraz sprawdziliśmy dokładność odczytów, przeprowadzając pomiary dwóch poziomów kontrolnych. Ta próbka, bez treści, CD4 i CD45; muszę teraz opisać Państwu, dlaczego CD45 jest tak istotny w naszej analizie.CD 45 jest markerem komórkowym, który znakuje wszystkie leukocyty w próbce. Jest to w tym kontekście istotne, ponieważ pozwala nam porównać liczbę leukocytów uzyskaną przy użyciu CD 45 z liczbą leukocytów wyznaczoną przez analizator morfologii krwi. Jak widać na tych przykładach, jest to wydruk morfologii krwi z analizatora LH seven 50 Beckman Coter i możemy zauważyć, że w cytometrze przepływowym przy użyciu CD 45, którym barwimy wszystkie leukocyty, liczba białych krwinek wynosi 7,1.Otrzymaliśmy bardzo podobną liczbę komórek w komórce wagowej CD wynoszącą 7,175. Akceptowalna byłaby wartość, w której różnica w stożkach wagowych komórek wynosi mniej niż 5%. Inną dodatkową zaletą włączenia CD 45 jest różnicowe barwienie CD 45 w leukocytach. W cytometrze przepływowym możemy wykorzystać trzy parametry: rozproszenie boczne, rozproszenie przednie oraz CD 45.Patrząc na ten histogram, limfocyty są wyraźnie zdefiniowane. Wykazują one zazwyczaj najsilniejsze barwienie dla CD 45 i mają najniższą złożoność – są to najprostsze komórki i te z najwyższą ekspresją CD 45. Kolejną grupą komórek są monocyty.Nasze monocyty wykazują nieco niższą ekspresję CD 45, ale są bardziej złożone niż limfocyty. Następnie kolejna główna grupa komórek, która w normalnej próbce stanowiłaby największą grupę, to komórki ziarnistościowe. Populacje te są najczęstszymi komórkami krwi występującymi we krwi obwodowej.Zaletą zastosowania barwienia CD45 w cytometrii przepływowej jest to, że możemy przeprowadzić oznaczenie CD4, oznaczenie absolutnej liczby leukocytów oraz zautomatyzowane różnicowanie w cytometrze przepływowym. Barwienie CD45 pozwala nam na wykonywanie różnicowania przez dłuższy czas.Możemy przeprowadzać te analizy do 48 godzin, jeśli wykorzystujemy ekspresję CD 45. Rozliczenia różnicowe wykonane tą metodą są mniej obiektywne niż w przypadku innych metod.Na przykład, w przypadku złotego standardu, jakim jest ręczne różnicowanie krwinek, możemy zidentyfikować populacje leukemiczne, co stanowi również podstawę dla panleukocytarnego CD, który jest tutaj wyświetlony na ekranie. Przewaga ekspresji CD 45 na białych krwinkach nie była dotąd w pełni wykorzystana w laboratoriach hematologicznych. Dysponujemy różnymi analizatorami morfologii krwi pełnej, które wykorzystują odmienne techniki do uzyskiwania różnicowania leukocytów.Wykorzystanie CD 45 w cytometrii przepływowej byłoby doskonałym sposobem na standaryzację rozkładu różnicowego między różnymi analizatorami hematologicznymi, ponieważ stanowiłoby jedną metodę, do której można by porównać wszystkie pozostałe analizatory hematologiczne. Dzień dobry, nazywam się dr Linda Sier.Aktywnie uczestniczę w badaniach nad HIV, obejmujących testowanie CD4 oraz CD8. Limfocyty T można podzielić na komórki CD4-dodatnie oraz komórki CD8-dodatnie, przy czym komórki CD4-dodatnie są wykorzystywane do monitorowania przebiegu HIV u pacjentów poddawanych leczeniu. Problemem w przypadku CD4 jest jednak fakt, że nie jest on wyrażany wyłącznie na limfocytach, lecz także wyrażają go CD4.W protokole PLG analizujemy trzy różne aspekty skutecznego rozróżniania monocytów i limfocytów. Po pierwsze, wykorzystujemy złożoność lub ziarnistość, dzięki której można zauważyć, że limfocyty i monocyty mogą zostać oddzielone w tym celu. Używamy również CD 45 C, co pozwala odróżnić populację limfocytów od populacji monocytów.Ekspresja CD4 jest silna w limfocytach i umiarkowana w monocytach, co w połączeniu z parametrem złożoności pozwala na ich rozróżnienie. Rozróżnienie między limfocytami z silną ekspresją CD4 a monocytami z niską ekspresją CD4 jest dość proste; pokażę Państwu przykład próbki od prawidłowego pacjenta, na której widać limfocyty oraz monocyty – u tego pacjenta liczba komórek CD4 przekraczała 700. Jeśli przyjrzymy się pacjentowi z liczbą komórek CD4 wynoszącą 53, można zauważyć, że mimo niskiej liczby CD4, rozróżnienie między limfocytami dodatnimi a monocytami dodatnimi pod kątem CD4 nadal pozostaje bardzo wyraźne.Dzięki zastosowaniu metody PLG jesteśmy w stanie przeprowadzać dużą liczbę analiz dziennie. W naszym laboratorium analizujemy obecnie około tysiąca próbek na dobę, co daje łącznie 5 000 próbek tygodniowo. Dwa tygodnie naszej pracy odpowiadają objętością pracy wykonywanej w ciągu całego roku.W szpitalu w Londynie, w RPA dysponujemy 70 laboratoriami NNRS, które w ciągu roku wykonują około 1,98 miliona testów CD4. Cześć, jestem Kni. Obecnie mam przerwę na herbatę, ale po jej zakończeniu opowiem wam o CD38 i ładunku wirusowym.Zasadniczo wszyscy wiemy, że cytometry przepływowe potrafią liczyć komórki, ale mogą one również zliczać cząsteczki powierzchniowe, czyli cząsteczki znajdujące się na powierzchni komórek. Odbywa się to poprzez pomiar intensywności fluorescencji. W standardowych warunkach, o których wspomniano wcześniej, stosujemy CD4 i CD45 w ramach tzw. metody PLG.Idziemy o krok dalej, umieszczając dwa testy w jednej probówce. Jest to metoda testowa CD 4 45 PLG. Połączymy ją z dwukolorowym testem na marker aktywacji lub inny parametr powiązany z ładunkiem wirusowym, mianowicie CD 38.Amerykanie stosują czterokolorową immunofluorescencję. Używają markerów CD4, CD45, CD8 oraz CD3. My stosujemy CD4, CD45 i CD8, a CD3 zastępujemy markerem CD38.Po pierwsze, należy zaznaczyć, że u pacjenta konieczne jest ustalenie poziomu bazowego CD38, ponieważ służy on jako kontrola dla danego pacjenta, a dzieje się to w momencie, gdy wiremia jest wysoka, prawda? Tak. Jest to moment, w którym pacjent zgłasza się z wysoką wiremią i niską liczbą CD4. Dzieje się to na początku, przed rozpoczęciem terapii.Musimy również zwrócić uwagę na skoki CD 38, gdzie występuje wzrost poziomu CD 38. Jest to widoczne u tego pacjenta, u którego nastąpił nagły wzrost MFI CD 38, a jeśli spojrzymy, widać również odpowiadający temu wzrost ładunku wirusowego. Czy możliwe jest, że pacjent nie przyjmował w tym czasie leków?Na tym etapie tak, jest możliwe, że pacjent przerwał terapię, ponieważ poziomy powróciły do normy. Dlaczego zatem jesteśmy tak zadowoleni z tego testu? Po pierwsze, łączy on dwie metody testowe w jednej probówce.Po drugie, metoda ta jest efektywna kosztowo, ponieważ pozwala na oznaczenie liczby białych krwinek CD 45, liczby komórek CD 4, a także markerów aktywacji. Jest ona stosowana na aparatach dostępnych obecnie w naszych laboratoriach, zatem nie ma potrzeby zakupu nowych urządzeń, a personel może zostać łatwo przeszkolony w zakresie przygotowywania próbek oraz wyznaczania bramek (gatingu). Koszty oznaczania miana wirusa również spadną, ponieważ obecnie przy każdej wizycie pacjenta w celu oznaczenia liczby CD 4 wykonywane są także testy miana wirusa.Jeśli jednak będziemy monitorować CD 38 i zauważymy wzrost MFI dla CD 38, dopiero wtedy możemy przekazać próbki pacjentów do testu miana wirusa. Odnośnie do funkcjonowania naszego narodowego programu w RPA, czyli programu NHLE CD four, który wykorzystuje PLG, w ramach którego udzielamy dużego wsparcia naszym laboratoriom: posiadamy ośrodek centralny, który koordynuje wszystkie znormalizowane procedury oraz całą kontrolę jakości, która jest zdecentralizowana i przekazana do laboratoriów terenowych.Uruchamiają swój system i przesyłają wyniki w ramach Zewnętrznej Kontroli Jakości (EQA) za pośrednictwem naszych placówek w Afryce do laboratorium centralnego, które zapewnia wsparcie. Działania te są uzupełniane przez dodatkowe, stałe inicjatywy szkoleniowe oraz usługi wsparcia. Jako grupa nasz program osiąga znacznie lepsze wyniki niż inne programy krajowe – różnica jest znacząca, przekraczając 50% w zakresie precyzji, nie tylko w obrębie poszczególnych laboratoriów, ale również pomiędzy nimi.Oznacza to, że wynik CD4 z laboratorium w Berley będzie bardzo podobny do wyniku CD4 z laboratorium w Durbanie, na przykład przy zastosowaniu naszej zestandaryzowanej powierzchni. Ten koncept można następnie przenieść i zdecentralizować do punktów opieki bezpośredniej (point-of-care). Po drugie, oznacza to, że opieka w punkcie bezpośrednim będzie wspomagana przez jedną jednostkę koordynującą.Było oczywiste, że wysiłki wykazane przez te oddane osoby stanowią postępy koncepcyjne, a nie jedynie powrót do cytometru przepływowego z poprzedniego kwartału, który mógłby przynieść takie wyniki. Te same koncepcje można zastosować w innych instrumentach, takich jak urządzenia Ton Dickinson, urządzenia Partec lub urządzenia wyprodukowane przez firmę Accur lub jakąkolwiek inną firmę. W rzeczywistości ostatnie osiągnięcia z innych krajów, na przykład z Indii, pokazują, że powinni oni rozwijać własny przemysł cytometrii przepływowej, który wykorzystywałby tę samą technologię.Jedyną istotną kwestią w tym przypadku była wyjątkowa koordynacja. Osoby uważające, że jedynym celem jest oznaczanie liczby komórek CD4, są w błędzie, ponieważ tutaj zajmowaliśmy się pełną morfologią krwi, liczbami bezwzględnymi oraz rozmazem krwi obwodowej. Badaliśmy CD4, a także markery aktywacji, co sprawia, że testy te są tańsze niż porównywalne oznaczenia wiremii.Niemniej jednak nie jest to rywalizacja między tymi markerami aktywacji a ładunkiem wirusowym, lecz rodzaj uzupełniającego układu, który pozwala zredukować koszty oznaczeń ładunku wirusowego. Są to badania naukowo zweryfikowane i klinicyści powinni przeprowadzać te analizy w sytuacjach, gdy budzi wątpliwości przestrzeganie terapii przez pacjenta, skuteczność leku lub gdy konieczna jest zmiana terapii z powodu pojawiającej się u pacjenta oporności. Kluczowym wnioskiem jest zapewnienie obecnie dobrej kontroli jakości, co prowadzi nas do ostatniego punktu: znacznie korzystniejsze jest posiadanie doskonałych laboratoriów centralnych, które mogą następnie zapewnić cytometrię przepływową i kontrolę jakości oraz przeprowadzać oceny laboratoriów peryferyjnych, dzięki czemu laboratoria te będą w stanie włączyć większą liczbę osób do programów terapii antyretrowirusowej.Zatem w ten sposób przedstawiliśmy nowe odkrycia pochodzące z gleb afrykańskich. Bardzo dziękuję za uwagę.

comprehensive-cost-effective-laboratory-monitoring-hivaids-an-african

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia i infekcje

Kompleksowe i opłacalne monitorowanie laboratoryjne HIV/AIDS: afrykański wzorzec do naśladowania

Ilościowe oznaczenie poziomu RNA HIV-1 w osoczu oraz sekwencjonowanie pojedynczych genomów HIV-1 u osób z wiremią poniżej granicy wykrywalności (50-75 kopii/ml) jest trudne. W niniejszym materiale opisujemy sposób izolacji i oznaczania ilościowego wirusowego RNA z osocza przy użyciu testu real-time PCR, który wiarygodnie mierzy poziom RNA HIV-1 aż do 0,3 kopii/ml, a także metodę amplifikacji genomów wirusowych poprzez sekwencjonowanie pojedynczych genomów z próbek o bardzo niskiej ładunku...

Amplifikacja i kwantyfikacja RNA HIV-1 u osób zakażonych HIV z ładunkiem wirusowym poniżej granicy wykrywalności standardowych testów klinicznych

Opisano metodę enumeracji CD4, tzw. α-test, która wykorzystuje pełną ślinę do szybkiego i dokładnego oznaczania liczby komórek CD4. α-test jest niezwykle tani i eliminuje konieczność specjalistycznego szkolenia technicznego, stosowania kosztownych odczynników, takich jak przeciwciała monoklonalne, użycia aparatury, chłodzenia, transportu próbek, a także pobierania i przetwarzania krwi.

Test &alpha;: Szybkie bezkomórkowe oznaczanie liczby limfocytów CD4 z wykorzystaniem całej śliny

Testy oporności na leki dla osób zakażonych wirusem HIV-1, u których nie powiodła się terapia antyretrowirusowa (ART), mogą ukierunkować przyszłe terapie i poprawić wyniki leczenia. Optymalizacja indywidualnych i populacyjnych wyników zdrowotnych w warunkach wysokiego rozpowszechnienia HIV, ale ograniczonych zasobów, będzie ostatecznie wymagała przystępnych cenowo i dostępnych metod genotypowania i interpretacji oporności na leki.

Przystępna cenowo metoda monitorowania oporności na leki HIV-1 w warunkach ograniczonych zasobów

Tutaj opisujemy cytotoksyczność komórkową i testy zakaźności w pojedynczej rundzie, które pozwalają na szybkie i dokładne badanie przesiewowe związków w celu określenia ich cytotoksyczności komórkowej (CC50) i wartości IC50 przeciwko WT i lekoopornemu HIV-1.

Szybkie badania przesiewowe w kierunku inhibitorów odwrotnej transkryptazy i integrazy HIV

Patogeneza HIV-1 jest definiowana zarówno przez cechy wirusa, jak i czynniki genetyczne gospodarza. W tym miejscu opisujemy solidną metodę, która pozwala na powtarzalne pomiary w celu oceny wpływu zmienności sekwencji genu gag na zdolność replikacji wirusa in vitro.

Metoda klonowania oparta na enzymach restrykcyjnych w celu oceny zdolności replikacji in vitro chimerycznych wirusów HIV-1 podtypu C Gag-MJ4

Dostarczony jest protokół do opracowania testu amplifikacji polimerazy rekombinazy w czasie rzeczywistym w celu ilościowego określenia początkowego stężenia próbek DNA za pomocą termocyklera lub mikroskopu i podgrzewacza scenicznego. Opisano również rozwój wewnętrznej kontroli pozytywnej. Dostępne są skrypty do przetwarzania surowych danych fluorescencyjnych w czasie rzeczywistym.

Opracowanie ilościowego testu amplifikacji polimerazy rekombinazy z wewnętrzną kontrolą pozytywną

Współinfekcja człowieka jest trudna do odtworzenia in vitro. Jednak ludzkie pasożyty malarii mogą być łatwo hodowane in vitro, podobnie jak świeżo wyizolowane ludzkie komórki jednojądrzaste krwi obwodowej naturalnie zakażone wirusem HIV. Stanowi to doskonały model do badania wczesnych odpowiedzi immunologicznych na pasożyty malarii w kontekście współzakażenia wirusem HIV.

Model in vitro do pomiaru odpowiedzi immunologicznej na malarię w kontekście współzakażenia wirusem HIV

Indywidualne sekwencjonowanie prowirusowe o pełnej długości (FLIPS) zapewnia efektywną i wysokoprzepustową metodę amplifikacji i sekwencjonowania pojedynczych, prawie pełnej długości (nienaruszonych i wadliwych) prowirusów HIV-1 i pozwala na określenie ich potencjalnej zdolności replikacyjnej. Projekt FLIPS pozwala przezwyciężyć ograniczenia poprzednich testów zaprojektowanych do sekwencjonowania utajonego rezerwuaru HIV-1.

Amplifikacja prowirusów HIV-1 o niemal pełnej długości do sekwencjonowania nowej generacji

Opracowaliśmy protokół do generowania i oceny humanizowanego i ludzkiego modelu myszy NOG zakażonego wirusem niedoboru odporności na podstawie przeszczepu komórek macierzystych, dopochwowej ekspozycji na ludzkiego wirusa niedoboru odporności i kropelkowej cyfrowej kwantyfikacji RNA PCR.

Humanizowane myszy NOG do dopochwowej ekspozycji na HIV i leczenia zakażenia HIV

Tutaj prezentujemy protokół, w którym pojedyncze komórki są monitorowane pod kątem ostrych zdarzeń i produktywnego zakażenia HIV-1 na urządzeniu nanofluidycznym. Dane obrazowe definiują interakcje wirus-receptor gospodarza i dynamikę szlaku sygnałowego. Jest to pierwsza metoda nanofluidycznej, wysokoprzepustowej, podłużnej hodowli pojedynczej komórki i obrazowania w celu zbadania kinetyki sygnalizacji i interakcji molekularnych.

Jednokomórkowa charakterystyka napływu wapnia i zakażenia HIV-1 przy użyciu wieloparametrowej platformy optofluidycznej

Poznaj metodę cytometrii przepływowej do monitorowania terapii antyretrowirusowej HIV w warunkach ograniczonych zasobów. To kompleksowe podejście poprawia diagnostykę i opiekę nad pacjentami w RPA.

Kompleksowy i efektywny kosztowo monitoring laboratoryjny HIV/AIDS: afrykański wzór do naśladowania

Przeglądaj więcej filmów