Name: Organtypowa kultura plasterkowa mózgów szczurów E18 (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: Naucz się przygotowywać organtypowe kultury plasterkowe mózgów szczurów E18. Ta metoda obejmuje disekcję, zatopienie w agarozie, cięcie wibratorem i hodowlę. Technika ta umożliwia badanie rozwoju kory mózgowej oraz migracji neuronów in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

organotypowa hodowla plastrów mózgu szczura w 18. dniu embrionalnym (e18)

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

Organotypowe hodowle skrawków z embrionalnych mózgów gryzoni są szeroko stosowane w badaniach nad rozwojem mózgu. Choć systemy in vivo często oferują pewne zalety, organotypowe hodowle skrawków umożliwiają przeprowadzenie szeregu manipulacji, które obecnie nie są możliwe do wykonania in vivo. Do tej pory organotypowe hodowle skrawków embrionalnego mózgu wykorzystywano do śledzenia pojedynczych komórek za pomocą mikroskopii time-lapse, manipulowania ekspresją genów w wypustkach zwojowych (regionie trudnym do ukierunkowania podczas elektroporacji in utero) oraz do badań farmakologicznych. W niniejszym protokole wideo demonstrujemy, jak przygotować organotypowe hodowle skrawków z embrionów szczura w 18. dniu rozwoju embrionalnego. Protokół obejmuje wypreparowanie embrionów, ich zatapianie na lodzie w agarozie o niskiej temperaturze topnienia, krojenie zatopionych mózgów na wibratomie, a na koniec przenoszenie skrawków na filtry w naczyniach hodowlanych. Niniejszy protokół w obecnej formie jest również możliwy do zastosowania przy tworzeniu organotypowych hodowli skrawków z różnych stadiów embrionalnych zarówno u szczurów, jak i myszy.

Organotypowa hodowla plastrów mózgu szczura w 18. dniu embrionalnym (E18)

Organotypowe hodowle skrawków embrionalnego mózgu gryzoni są szeroko stosowane w badaniach nad rozwojem mózgu. Choć systemy in vivo często oferują pewne korzyści, ...

Nazywam się Laura Elias. Jestem doktorantką w dziedzinie neuronauki, pracującą w laboratorium Arnolda K. Steina. Znajdujemy się w Instytucie Medycyny Regeneracyjnej na UCSF i dzisiaj pokażę Państwu, jak przeprowadzić organotypową hodowlę plastrów mózgu szczura w stadium E 18.Procedura ta obejmuje wypreparowanie mózgów, ich zatopienie w niskotopliwym agarozie, a następnie krojenie na wibrotomie w celu uzyskania przekrojów koronowych i umieszczenie ich w systemie hodowli plastrów. Do przeprowadzenia tej procedury hodowli plastrów wykorzystuje się kilka ważnych narzędzi i odczynników. Do wypreparowania mózgów niezbędny będzie mikroskop stereoskopowy.Używamy również tego urządzenia w sposób podobny do wibrotomu VT 1000 S, który jest dobrym systemem do wycinania skrawków. Dobór kleju może mieć duże znaczenie. Stosujemy ten rodzaj kleju, ponieważ bardzo dobrze mocuje on mózg; w przypadku użycia niewłaściwego rodzaju kleju tkanka może odkleić się podczas próby cięcia, co może być problematyczne.Używamy również filtrów typu milli-cell, na których osadzamy nasze skrawki podczas hodowli; jest to również istotna część procesu. Zanim rozpoczniecie proces hodowli skrawków, należy wykonać kilka

organotypic-slice-culture-of-e18-rat-brains

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Organotypiczna kultura kroju mózgów szczurów E18

Organoptypowy model hodowli plastrów hipokampa jest modelem in vitro stosowanym do badania uszkodzeń neuronalnych w różnych paradygmatach. W niniejszym artykule opisujemy metody przygotowania hodowli plastrów oraz ilościowego oznaczania uszkodzeń neuronalnych.

Model organotypowej hodowli skrawków hipokampa do badania uszkodzeń neuronów

Niniejszy protokół opisuje test z wykorzystaniem organotypowych przekrojów zoptymalizowany dla mózgu postnatalnego oraz wysokorozdzielcze obrazowanie time-lapse migracji neuroblastów w rostralnym prądzie migracyjnym.

Organotypowy test skrawkowy do wysokorozdzielczego obrazowania poklatkowego migracji neuronalnej w mózgu postnatalnym

Niniejszy protokół opisuje sposób przygotowania i utrzymania preparatu przekroju nowokory w kulturze organotypowej w celu wykonania rejestracji elektrycznej z neuronów piramidowych.

Rejestracja całokomórkowa z organotypowego preparatu skrawka neokory

Opisano metodę przygotowania organotypowych skrawków z embrionalnego śródmózgowia myszy w stadium E12.5. Organotypowe hodowle skrawków mogą być wykorzystywane do obserwacji zachowania neuronów dopaminergicznych lub innych neuronów z brzusznej części śródmózgowia.

Organotypowe hodowle plastrów embrionalnego brzusznego śródmózgowia: system do badania rozwoju neuronów dopaminergicznych in vitro

W celu przeprowadzenia szybkiej oceny funkcji genów w rozwoju kory mózgu opisujemy metody obejmujące elektroporację ex vivo plazmidów koekspresujących inhibicyjne RNA (RNAi) i GFP w zarodkowej korze mysiej. Protokół ten nadaje się do badania różnych aspektów neurorozwoju, takich jak neurogeneza, migracja neuronów oraz morfogeneza neuronów, w tym wzrost dendrytów i aksonów.

Metody badania morfogenezy neuronalnej: Elektroporacja RNAi ex vivo w embrionalnej korze mózgu myszy

Ten film demonstruje metodę przygotowania organotypowych kultur wycinków hipokampa z mózgu szczeniaka szczura. Przedstawia etapy związane z sekcją hipokampa, krojeniem i warunkami hodowli wymaganymi do promowania żywotności i wzrostu komórek w wycinkach hipokampa, ostatecznie generując organotypowe kultury warstwowe.

Przygotowanie organtypowych kultur plasterkowych z hipokampa szczeniaka szczura

Wideo demonstruje metodę uzyskiwania wycinków kory nosowej i hipokampa z mózgu szczeniaka szczura i hodowania ich w błoniastych wkładkach na wielodołkowej płytce wypełnionej pożywką do dalszej analizy.

Przygotowanie plasterków kory nosa i hipokampa z mózgu szczeniaka szczura

Opisano technikę badania komórek NG2 i oligodendrocytów za pomocą systemu hodowli plasterkowej w przodomózgowiu i móżdżku.  Metoda ta pozwala na badanie dynamiki proliferacji i różnicowania komórek w obrębie linii oligodendrocytów, w której można łatwo manipulować środowiskiem zewnątrzkomórkowym przy zachowaniu cytoarchitektury tkanek.

Organotypowe kultury warstwowe do badania dynamiki oligodendrocytów i mielinizacji

Tutaj opisujemy technikę badania neurogenezy poporodowej hipokampa za pomocą techniki organotypowej hodowli plastrów. Metoda ta pozwala na manipulację neurogenezą dorosłych w warunkach in vitro i pozwala na bezpośrednie zastosowanie środków farmakologicznych do hodowanego hipokampa.

Organotypowe kultury warstwowe do badań neurogenezy poporodowej

Opisujemy protokół specyficznej dla typu komórki ekspresji genetycznie kodowanego czujnika opartego na FRET ATeam1.03YEMK w organotypowych kulturach warstwowych przodomózgowia myszy. Ponadto pokazujemy, jak wykorzystać ten czujnik do dynamicznego obrazowania komórkowych poziomów ATP w neuronach i astrocytach.

Obrazowanie wewnątrzkomórkowego ATP w organotypowych wycinkach tkanki mózgu myszy przy użyciu czujnika ATeam1.03YEMK opartego na FRET

Tutaj opisujemy przygotowanie organicznych plastrów kory nosa i hipokampa. Przy stopniowym i kontrolowanym pozbawianiu surowicy, plastry te przedstawiają ewoluujące zdarzenia podobne do padaczki i mogą być uważane za model epileptogenezy ex vivo. System ten stanowi doskonałe narzędzie do monitorowania dynamiki spontanicznej aktywności, a także do oceny progresji cech neurozapalnych w całym przebiegu epileptogenezy.

Model epileptogenezy w organotypowych kulturach warstwowych kory nosa i hipokampa

Naucz się przygotowywać organtypowe kultury plasterkowe mózgów szczurów E18. Ta metoda obejmuje disekcję, zatopienie w agarozie, cięcie wibratorem i hodowlę. Technika ta umożliwia badanie rozwoju kory mózgowej oraz migracji neuronów in vitro.

Organotypowa hodowla plastrów mózgu szczura w 18. dniu embrionalnym (E18)

Przeglądaj więcej filmów