Co to są zewnątrzkomórkowe wezykuły?

Zewnątrzkomórkowe wezykuły (EV) to nanoskalowe cząstki uwalniane przez komórki, które przenoszą różne biocząsteczki.

Dlaczego w tej metodzie stosuje się octan uranylu?

Octan uranylu jest stosowany do barwienia EV, poprawiając ich kontrast dla lepszej wizualizacji pod TEM.

Jaka jest znaczność zastosowania TEM?

TEM zapewnia obrazy o wysokiej rozdzielczości, umożliwiając szczegółowe badanie morfologii i wielkości EV.

Jak EV są przygotowane do obrazowania?

EV są skoncentrowane i oczyszczane przed nałożeniem na siatkę TEM do obrazowania.

Czy tę metodę można zastosować do EV z innych organizmów?

Tak, metodę można dostosować do EV z różnych źródeł biologicznych.

Wizualizacja pęcherzyków zewnątrzkomórkowych sinic za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiology

0 views • 2:01 min • August 29th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Umieść mikroskopię elektronów transmisyjnych pokrytą poliwinylową żywicą formalną lub siatkę TEM na czystej folii z tworzywa sztucznego.

Dodaj zawiesinę skoncentrowanych i oczyszczonych pęcherzyków zewnątrzkomórkowych lub EV, nanosize'owych, związanych z błoną cząstek, do siatki.

Te EV są wydzielane przez cyjanobakterie i przenoszą makrocząsteczki w swoich błonach.

Inkubuj siatkę, aby umożliwić EV adsorbację na jej powierzchni pokrytej żywicą.

Dotknąć krawędzi siatki czystą bibułą filtracyjną, aby wchłonąć nadmiar zawiesiny.

Unieś siatkę na octanie uranylu, aby zabarwić przylegające pęcherzyki.

Octan uranylu otacza pęcherzyki, tworząc ciemny kontur, który zwiększa kontrast podczas obrazowania.

Usuń siatkę i użyj bibuły filtracyjnej, aby wchłonąć nadmiar plamy.

Umyj kratkę ultraczystą wodą, aby usunąć wszelkie pozostałości plam. Powtórz pranie, a następnie pozostaw do wyschnięcia na powietrzu.

Na koniec zwizualizuj pojazdy elektryczne za pomocą TEM, aby ocenić ich morfologię, rozmiar i czystość.

Ostrożnie nałóż pięć mikrolitrów pęcherzyka i pozostaw na pięć minut. Usunąć próbkę, dotykając krawędzią siatki kawałka czystej bibuły filtracyjnej.

Odpipetować od 20 do 50 mikrolitrów 2% octanu uranylu na płaską powierzchnię pokrytą folią z tworzywa sztucznego. Następnie umieść na nim unoszącą się na nim siatkę na dwie minuty. Usuń octan uranylu za pomocą bibuły filtracyjnej i unieś się na krótko na kropli ultraczystej wody do umycia.