Śledzenie dynamiki infekcji bakteryjnych u myszy za pomocą bioluminescencji

Rozpocząć od zawiesiny atenuowanego szczepu bakterii chorobotwórczej.

Atenuowany szczep wykazuje zmniejszoną patogenność ze względu na ukierunkowane delecje w genach wirulencji.

Bakterie są znakowane chromosomalnie za pomocą bioluminescencyjnego operonu, który umożliwia autonomiczną produkcję światła.

Bakterie wyrażają bioluminescencyjny operon, wytwarzając enzym lucyferazy i kompleks enzymatyczny, który syntetyzuje substrat lucyferazy.

Lucyferazy utlenia substrat w celu wytworzenia światła widzialnego.

Odwirować zawiesinę i odrzucić supernatant.

Umyj komórki buforem, ponownie odwiruj i wyrzuć supernatant w celu usunięcia pozostałych składników niekomórkowych.

Ponownie zawiesić komórki w buforze, aby osiągnąć optymalne stężenie bakterii i pobrać zawiesinę do strzykawki.

Zawiesinę wstrzyknąć dootrzewnowo myszy, a następnie przenieść do klatki.

Wizualizuj sygnał bioluminescencyjny w regularnych odstępach czasu.

Osłabiony szczep pozostaje zlokalizowany, a bioluminescencja stopniowo maleje, co wskazuje na usunięcie infekcji.

Rano w dniu wstrzyknięcia rozmrażaj kriowia komórek bakteryjnych w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez trzy do czterech godzin. Po rozmrożeniu należy przechowywać fi