Izolacja bakterii Gram-ujemnych z insercją transpozonów genomowych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:52 min. • September 26th, 2025
Rozpocznij od rozmrożenia zamrożonej kultury pokrytej populacji bakterii Gram-ujemnych dawcy i biorcy na lodzie.
Komórki biorcze przenoszą transpozony, krótkie segmenty DNA, które zawierają gen oporności na antybiotyk kanamycynę. Te transpozony są losowo integrowane z genomem gospodarza.
Dodaj kulturę do bogatej w składniki odżywcze płytki agarowej zawierającej kanamycynę, ale bez składników odżywczych specyficznych dla dawcy.
Dodaj sterylne koraliki i delikatnie obróć płytkę, aby równomiernie rozprowadzić kulturę.
Usuń koraliki i inkubuj. Bakterie biorcy wykorzystują składniki odżywcze, ale tylko te ze zintegrowanymi transpozonami są odporne na kanamycynę, co prowadzi do tworzenia kolonii.
Bakterie dawcy i biorcy bez transpozonów nie rozwijają się.
Policz jednostki tworzące kolonie, aby oszacować liczbę bakterii biorców z unikalnymi insercjami transpozonów.
Dodaj świeże podłoże i zbierz populację bakterii.
Odwirować w celu osadzenia bakterii i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić osad w pożywce z krioprotektantem, aby zachować żywotność bakterii.
Rozmrozić podwielokrotność zamrożonego krycia na lodzie. Następnie za pomocą sterylnych szklanych kulek rozprowadzić 150 mikrolitrów rozcieńcze
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych