Obrazowanie bioluminescencyjne progresji guza piersi w modelu mysim płci żeńskiej

Zacznij od samicy myszy, której wstrzyknięto komórki guza piersi wykazujące ekspresję lucyferazy.

Komórki nowotworowe namnażają się w miejscu wstrzyknięcia i przekształcają się w guz pierwotny.

Umieść mysz w komorze obrazowania z przepływem znieczulającym, aby znieczulić mysz.

Następnie wstrzyknij lucyferynę, substrat dla lucyferazy, do znieczulonej myszy.

Lucyferyna krąży i wnika do komórek nowotworowych, reagując z lucyferazy, emitując bioluminescencję.

Korzystając z systemu obrazowania, przechwyć sygnał bioluminescencji z myszy.

Z biegiem czasu guz postępuje w miejscu pierwotnym i daje przerzuty do płuc.

Pobieraj obraz myszy w regularnych odstępach czasu i definiuj obszary zainteresowania.

Opierając się na intensywności bioluminescencji, skonstruuj kinetykę wzrostu guza dla obu miejsc.

Z biegiem czasu stały wzrost sygnału w miejscu guza pierwotnego wskazuje na ciągłą proliferację guza.

Jednak gwałtowny wzrost bioluminescencji płuc w późniejszych punktach czasowych sugeruje przerzuty komórek nowotworowych.

Na początek utrzymuj linię komórkową 4T1 w uzupełnionym Dulbecco's Modified Eagle Medium lub DMEM. Inkubuj komórki w temperaturze 37 stopni Celsjusza w wilgotnej atmosferze zawierającej 5 procent dwutlenku węgla.

Transfekcja linii komórkowej 4T1 za pomocą genu Luc2 w celu ekspresji lucyferazy, enzymu bioluminescencyjnego, który jest wytwarzany konstytutywnie. Inkubuj komórki, aby były gotowe do wstrzyknięcia myszy.

Pięć minut po znieczuleniu i przygotowaniu samicy myszy Balb-C, wstrzyknij 2 razy 10 do mocy pięć komórek 4T1 eksprymujących lucyferazy podskórnie do lewego grzbietu za pomocą 1-mililitrowej strzykawki insulinowej. Zwierzę należy trzymać w domu przez 4 tygodnie po wstrzyknięciu.

W celu obrazowania umieść znieczuloną mysz w grzbietowej pozycji leżącej w wyznaczonym obszarze sprzętu do obrazowania bioluminescencyjnego. Wstrzyknąć myszy dootrzewnowo 100 mikrolitrów roztworu D-lucyferyny o stężeniu 15 miligramów na mililitr.

Aby dostosować parametry obrazowania, ustaw filtr emisyjny otwarty bez wzbudzenia, kategoryzację na 8, przysłonę na 2, a typ pola widzenia na D. Uchwyć 20 obrazów bioluminescencyjnych w ciągu 20 minut dla każdego zwierzęcia w każdym punkcie końcowym obrazowania, upewniając się, że obrazy reprezentują 60-sekundową integrację sygnału.

Korzystając z oprogramowania sprzętu, zdefiniuj określone obszary zainteresowania, aby odróżnić sygnały guza pierwotnego od przerzutów do płuc. Zidentyfikuj sygnały bioluminescencyjne w miejscu wstrzyknięcia i w okolicy klatki piersiowej, w której występują przerzuty. Oblicz progresję guza na podstawie intensywności sygnału bioluminescencyjnego.

Korzystając z obrazów zbieranych co tydzień, skonstruuj profil kinetyki wzrostu, aby przedstawić zmiany intensywności sygnału w czasie zarówno w guzie pierwotnym, jak i w miejscach przerzutów. Porównaj trendy intensywności sygnału, aby przeanalizować progresję guza i przerzuty.