Ocena aktywności bakteryjnego chaperonów poprzez termiczne rozwijanie białka modelowego
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:38 min. • November 28th, 2025
Zacznij od umieszczenia kuwety w spektrofotometrze fluorescencyjnym wyposażonym w uchwyt i mieszadło do sterowania temperaturą.
Dodaj wcześniej podgrzany bufor o umiarkowanie kwaśnym pH i ustaw temperaturę w utrzymaniu, aby symulować warunki naprężenia.
Do próbki testowej dodaj kwasowo-ochronny chaperon pochodzący z E. coli.
W próbce sterującej dodaj równą objętość bufora.
Następnie wprowadź białko substratu wrażliwe na temperaturę i kwasy do obu próbek.
Zacznij monitorować rozpraszanie światła.
Inkubować próbki w warunkach stresu, aby wywołać rozkładanie podłoża.
Przy umiarkowanie kwaśnym pH chaperon aktywuje się i stabilizuje rozwinięte białko.
Dodaj roztwór soli neutralizujący pH i kontynuuj rejestrowanie rozpraszania światła.
W próbce kontrolnej powrót do neutralnego pH powoduje agregację rozwiniętego białka, zwiększając rozpraszanie światła.
W próbce badanej chaperon sprzyja ponownemu składaniu podłoża, co powoduje mniejsze rozpraszanie światła w porównaniu do grupy kontrolnej.
Porównaj sygnały rozpraszania światła, aby ocenić aktywność opiekunów.
Umieść kwarcową kuwetę o jednym mililitrze w spektrofotometrze fluorescencyjnym wyposażonym w uchwyty i mieszadła do próbek z kontrolą temperat
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych