Obrazowanie w czasie rzeczywistym infekcji bakteryjnej w modelu myszy z użyciem bioluminescencji

Weźmy znieczuloną mysz wcześniej zainfekowaną patogennym szczepem bakterii zaprojektowanym do ekspresji genetycznie zintegrowanego operonu bioluminescencji.

Operon koduje lucyferazę oraz kompleks multienzymatyczny syntetyzujący jej substrat.

Enzym lucyferazy katalizuje reakcję z tymi substratami, tworząc widoczną luminescencję.

Umieść mysz w pozycji leżącej na platformie stabilizowanej temperaturą komory obrazującej i utrzymuj znieczulenie podczas obrazowania.

Użyj systemu obrazowania do rejestrowania zarówno bioluminescencyjnych, jak i odpowiadających im obrazów rentgenowskich myszy.

Obraz bioluminescencyjny ujawnia zakres infekcji bakteryjnej, natomiast obraz rentgenowski stanowi anatomiczny punkt odniesienia do lokalizacji infekcji.

Po zdjęciu należy odłożyć mysz do klatki i pozwolić na regenerację.

Rejestruj obrazy bioluminescencji w regularnych odstępach czasu, aby monitorować postęp infekcji bakteryjnej w czasie rzeczywistym.

Z czasem obecność sygnałów bioluminescencyjnych w różnych miejscach potwierdza rozprzestrzenianie się infekcji w całym organizmie żywiciela.

Aby sfotografować zwierzęta, przygotuj system obrazowania, ustawiając parametry kamery i podgrzewając scenę. Ustaw przepływ tlenu na 1,5 litra na minutę i izofluran na 3,5% i przenieś mysz do komory znieczulającej, a następnie do etapu stabilizacji temperatury po znieczuleniu. Ustaw mysz na plecach z wyciągniętymi ramionami i dopasuj stożek nosa do podawania 2,5% izofluranu podczas obrazowania.

Zamknij drzwi i zrób bioluminescencyjne zdjęcia oraz zdjęcia rentgenowskie myszy. Po zakończeniu obrazowania wróć mysz do klatki i monitoruj ją. Powinien odzyskać przytomność w ciągu 3 do 5 minut.