Wykonywanie chromatografii cienkowarstwowej w celu oceny degradacji egzopolisacharydów bakterii
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 2:23 min. • March 31st, 2026
Zacznij od fermentowanych supernatantów zawierających zdegradowane i niedegradowane egzopolisacharydy, czyli EPS.
EPS te powstają podczas fermentacji, gdzie odrębne populacje bakterii kałowych w każdym supernatancie działają na EPS inaczej.
Zlokalizuj supernatanty w pobliżu podstawy cienkowarstwowej płyty chromatograficznej, wcześniej pokrytej fazą nieruchomą biegunową.
Płytkę susz na powietrzu, a następnie umieść ją w komorze zawierającej fazę ruchomą o niższej polaryzacji niż faza stacjonarna.
W miarę wzrostu fazy ruchomej EPS migrują w zależności od swojej polaryzacji i wielkości.
Duże, niedegradowane EPS silnie oddziałują z fazą stacjonarną i pozostają blisko punktu początkowego.
Mniejsze zdegradowane fragmenty wiążą się słabo i migrują w górę wraz z fazą ruchomą.
Zdejmij talerz i wysusz go na powietrzu.
Zanurz płytkę w odczynniku barwiającym węglowodany, który reaguje z EPS.
Wysusz płytkę na powietrzu, a następnie podgrzej, aby odwodnić EPS i uformować kolorowe paski.
Pojedynczy pas w pobliżu źródła potwierdza niezniszczony EPS, natomiast wiele pasm potwierdza degradację EPS przez bakterie.
Na każdą wcześniej powlekaną płytę aluminiową 60 TLC zamieszaj 0,2 mikrolitra fermentowanych super
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych