Test odporności na etanol w celu oceny integralności matrycy biofilmu

Weźmy biofilmy pochodzące z bakterii patogennych uprawiane na agarze odżywczym.

Nieobrobiony biofilm zawiera gęsto upakowane bakterie w ochronnej macierzy zewnątrzkomórkowej.

Biofilm objęty inhibitorem zawiera luźno powiązane komórki w rzadkiej macierzy.

Podziel każdy biofilm na pół, następnie naświetl jedną połowę buforem jako kontrolę, a drugą etanolem, aby wywołać stres przeciwdrobnoustrojowy.

W nieobtworzonym, eksponowanym etanolem biofilmie gęsta matryca zmniejsza dyfuzję etanolem i ogranicza penetrację komórek, co skutkuje mniejszym zabijaniem bakterii.

W biofilmie obtraktowanym inhibitorem i wystawionym na etanol, rzadka matryca pozwala etanolowi łatwiej przenikać, prowadząc do większego zabijania bakterii.

Wiruj rurki i usuń supernatant. Dodaj bufor i sonik, aby rozproszyć komórki.

Nakładaj rozcieńczone zawiesiny i inkubuj, aby umożliwić wzrost żywotnych bakterii.

Liczą jednostki tworzące kolonie (CFU); mniej CFU z biofilmu objętego inhibitorami i wystawionym na etanol potwierdza, że integralność matrycy jest niezbędna dla oporności na etanol.

Weź czystą żyletkę i pokrój kolonie biofilmu na dwie równe części z pomocą szablonu. Ostrożnie podnieś połowę kolonii czystą łopatką i przele