Name: Obrazowanie zmiany kształtu komórki w żywych zarodkach Drosophila (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Poznaj metodę obrazowania zmian kształtu komórek w żywych zarodkach Drosophila melanogaster przy użyciu konfokalnej mikroskopii czasowo-rozdzielczej z sondami GFP. Technika ta umożliwia badanie dynamicznych procesów rozwojowych w czasie rzeczywistym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Wyrażamy wdzięczność Ericowi Wieschausowi, który zapewnił podstawy, na których opracowano niniejszy protokół. Nasza praca jest wspierana przez Verna &amp; Marrs McLean Department of Biochemistry and Molecular Biology Start-up Award, Baylor College of Medicine.

<ol><li>Sagona, A. P., Stenmark, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokinesis+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Cytokinesis and cancer.</a> FEBS Lett. 584, 2652-2661 (2010).</li>
<li>Baum, B., Settleman, J., Quinlan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transitions+between+epithelial+and+mesenchymal+states+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Transitions between epithelial and mesenchymal states in development and disease.</a> Semin Cell Dev Biol. 19, 294-308 (2008).</li>
<li>Kibar, Z., Capra, V., Gros, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+understanding+the+genetic+basis+of+neural+tube+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Genet%22%5BJournal%5D)">Toward understanding the genetic basis of neural tube defects.</a> Clin Genet. 71, 295-310 (2007).</li>
<li>Jazwinska, A., Ribeiro, C., Affolter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+tube+morphogenesis+during+Drosophila+tracheal+development+requires+Piopio%2C+a+luminal+ZP+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial tube morphogenesis during Drosophila tracheal development requires Piopio, a luminal ZP protein.</a> Nat Cell Biol. 5, 895-901 (2003).</li>
<li>Martin, P., Parkhurst, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallels+between+tissue+repair+and+embryo+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Parallels between tissue repair and embryo morphogenesis.</a> Development. 131, 3021-3034 (2004).</li>
<li>Royou, A., Field, C., Sisson, J. C., Sullivan, W., Karess, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reassessing+the+role+and+dynamics+of+nonmuscle+myosin+II+during+furrow+formation+in+early+Drosophila+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Reassessing the role and dynamics of nonmuscle myosin II during furrow formation in early Drosophila embryos.</a> Mol Biol Cell. 15, 838-850 (2004).</li>
<li>Lecuit, T., Wieschaus, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarized+insertion+of+new+membrane+from+a+cytoplasmic+reservoir+during+cleavage+of+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Polarized insertion of new membrane from a cytoplasmic reservoir during cleavage of the Drosophila embryo.</a> J Cell Biol. 150, 849-860 (2000).</li>
<li>Mavrakis, M., Rikhy, R., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+membrane+polarity+and+compartmentalization+are+established+before+cellularization+in+the+fly+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Plasma membrane polarity and compartmentalization are established before cellularization in the fly embryo.</a> Dev Cell. 16, 93-104 (2009).</li>
<li>Cao, J., Crest, J., Fasulo, B., Sullivan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+Actin+Dynamics+Facilitate+Early-Stage+Centrosome+Separation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Cortical Actin Dynamics Facilitate Early-Stage Centrosome Separation.</a> Curr Biol. , (2010).</li>
<li>Cao, J., Albertson, R., Riggs, B., Field, C. M., Sullivan, W. N. uf <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Rab11+effector%2C+maintains+cytokinetic+furrow+integrity+by+promoting+local+actin+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">a Rab11 effector, maintains cytokinetic furrow integrity by promoting local actin polymerization.</a> J Cell Biol. 182, 301-313 (2008).</li>
<li>Sokac, A. M., Wieschaus, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+actin-dependent+endocytosis+is+zygotically+controlled+to+initiate+Drosophila+cellularization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Local actin-dependent endocytosis is zygotically controlled to initiate Drosophila cellularization.</a> Dev Cell. 14, 775-786 (2008).</li>
<li>Fox, D. T., Peifer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abelson+kinase+%28Abl%29+and+RhoGEF2+regulate+actin+organization+during+cell+constriction+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Abelson kinase (Abl) and RhoGEF2 regulate actin organization during cell constriction in Drosophila.</a> Development. 134, 567-578 (2007).</li>
<li>Martin, A. C., Kaschube, M., Wieschaus, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+contractions+of+an+actin-myosin+network+drive+apical+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pulsed contractions of an actin-myosin network drive apical constriction.</a> Nature. 457, 495-499 (2009).</li>
<li>Bertet, C., Sulak, L., Lecuit, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin-dependent+junction+remodelling+controls+planar+cell+intercalation+and+axis+elongation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Myosin-dependent junction remodelling controls planar cell intercalation and axis elongation.</a> Nature. 429, 667-671 (2004).</li>
<li>Blankenship, J. T., Backovic, S. T., Sanny, J. S., Weitz, O., Zallen, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+rosette+formation+links+planar+cell+polarity+to+tissue+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Multicellular rosette formation links planar cell polarity to tissue morphogenesis.</a> Dev Cell. 11, 459-470 (2006).</li>
<li>Caussinus, E., Colombelli, J., Affolter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tip-cell+migration+controls+stalk-cell+intercalation+during+Drosophila+tracheal+tube+elongation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Tip-cell migration controls stalk-cell intercalation during Drosophila tracheal tube elongation.</a> Curr Biol. 18, 1727-1734 (2008).</li>
<li>Gervais, L., Casanova, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+coupling+of+cell+elongation+and+lumen+formation+in+a+single+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">In vivo coupling of cell elongation and lumen formation in a single cell.</a> Curr Biol. 20, 359-366 (2010).</li>
<li>Gorfinkiel, N., Blanchard, G. B., Adams, R. J., Arias, M. artinez, A, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+control+of+global+cell+behaviour+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mechanical control of global cell behaviour during dorsal closure in Drosophila.</a> Development. 136, 1889-1898 (2009).</li>
<li>Solon, J., Kaya-Copur, A., Colombelli, J., Brunner, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulsed+forces+timed+by+a+ratchet-like+mechanism+drive+directed+tissue+movement+during+dorsal+closure%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Pulsed forces timed by a ratchet-like mechanism drive directed tissue movement during dorsal closure.</a> Cell. 137, 1331-1342 (2009).</li>
<li>Bownes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+photographic+study+of+development+in+the+living+embryo+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Embryol+Exp+Morphol%22%5BJournal%5D)">A photographic study of development in the living embryo of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 33, 789-801 (1975).</li>
<li>Sokac, A. M., Wieschaus, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zygotically+controlled+F-actin+establishes+cortical+compartments+to+stabilize+furrows+during+Drosophila+cellularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Zygotically controlled F-actin establishes cortical compartments to stabilize furrows during Drosophila cellularization.</a> J Cell Sci. 121, 1815-1824 (2008).</li>
<li>Morin, X., Daneman, R., Zavortink, M., Chia, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protein+trap+strategy+to+detect+GFP-tagged+proteins+expressed+from+their+endogenous+loci+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A protein trap strategy to detect GFP-tagged proteins expressed from their endogenous loci in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 15050-15055 (2001).</li>
<li>Oda, H., Tsukita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+cell-cell+adherens+junctions+reveals+that+Drosophila+mesoderm+invagination+begins+with+two+phases+of+apical+constriction+of+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of cell-cell adherens junctions reveals that Drosophila mesoderm invagination begins with two phases of apical constriction of cells.</a> J Cell Sci. 114, 493-501 (2001).</li>
<li>Kiehart, D. P., Galbraith, C. G., Edwards, K. A., Rickoll, W. L., Montague, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+forces+contribute+to+cell+sheet+morphogenesis+for+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Multiple forces contribute to cell sheet morphogenesis for dorsal closure in Drosophila.</a> J Cell Biol. 149, 471-490 (2000).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano konfliktów interesów.

Opisany w niniejszym dokumencie protokół umożliwi obrazowanie konfokalne na żywo szeregu zmian kształtu komórek w rozwijającym się zarodku muchy. Linie GFP do obrazowania mogą zostać przygotowane przez poszczególne laboratoria (Tabela 2), lecz wiele takich linii jest również ogólnodostępnych w centrach takich jak Bloomington Drosophila Stock Center na Uniwersytecie w Indianie (<a href="http://flystocks.bio.indiana.edu">http://flystocks.bio.indiana.edu</a>) oraz FlyTrap Stock Center na Uniwersytecie Yale (<a href...

<table><tbody><tr><td>Lamelki</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-343</td><td></td></tr><tr><td>Kryszki 25x25</td><td>Fisher Scientific</td><td>1 2-524C</td><td></td></tr><tr><td>Butelki z atomizerem (H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-897-11</td><td></td></tr><tr><td>Probówki Falcon 50 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-432-22</td><td></td></tr><tr><td>Gruszki do małych pipet, 1 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-448-21</td><td></td></tr><tr><td>Fiolki do scyntylacji z zakrętkami</td><td>VWR international</td><td>66021-533</td><td></td></tr><tr><td>Zlewki Tri-Corn, 100 mL</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>60970</td><td></td></tr><tr><td>Szalki Petriego BD Falcon 60x15mm </td><td>Fisher Scientific</td><td>08757 100B</td><td></td></tr><tr><td>Sito do komórek BD Falcon</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Żółte końcówki do pipet</td><td>Rainin</td><td>L200</td><td></td></tr><tr><td>Siatka ze stali nierdzewnej, 304, 12x24</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>CX-0150-F-01</td><td></td></tr><tr><td>Szklane pipety Pasteura 5&amp;#190; cala</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20B</td><td></td></tr><tr><td>Papier filtracyjny P4</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-803-6F</td><td></td></tr><tr><td>Gumki recepturki</td><td>Office Max</td><td>A620645</td><td></td></tr><tr><td>Dwustronna taśma Scotch, &amp;frac12; cala</td><td>Office Max</td><td>A8137DM-2</td><td></td></tr><tr><td>Pędzle malarskie Robert Simmons Expression E85 okrągłe nr 2</td><td>Jerry&amp;rsquo;s Artarama</td><td>56460</td><td></td></tr><tr><td>Pęseta Dumont nr 5 wysokiej precyzji Inox</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72701-DZ</td><td></td></tr><tr><td>Żyletki</td><td>VWR international</td><td>55411-050</td><td></td></tr><tr><td>Olej Halocarbon 27</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H 8773</td><td></td></tr><tr><td>Heptan</td><td>Fisher Scientific</td><td>H360-1</td><td></td></tr><tr><td>Agar BD Bacto</td><td>VWR international</td><td>90000-760</td><td></td></tr><tr><td>Sacharoza</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7903</td><td></td></tr><tr><td>Kwas p-hydroksybenzoesowy</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H5501</td><td></td></tr><tr><td>Aktywne drożdże suszone Red Star</td><td>LeSaffre</td><td>15700</td><td></td></tr><tr><td>Ręczniki papierowe, składane w C</td><td>Kleenex</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wzmocniona folia aluminiowa</td><td>Reynolds Wrap</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wybielacz</td><td>Austin&amp;rsquo;s A-1 Commercial</td><td></td><td></td></tr><tr><td>100% sok jabłkowy</td><td>Ocean Spray lub Tree Top</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

obrazowanie zmian kształtu komórek w żywych zarodkach drosophila

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Rozwijający się embrion Drosophila melanogaster przechodzi szereg zmian kształtu komórek, które są bardzo podatne na obrazowanie konfokalne żywych tkanek. Zmiany kształtu komórek u muchy są analogiczne do tych występujących u organizmów wyższych i napędzają morfogenezę tkanek. W związku z tym, w wielu przypadkach ich badanie ma bezpośrednie znaczenie dla zrozumienia chorób ludzkich (Tabela 1)1-5. W skali subkomórkowej zmiany kształtu komórek są wynikiem procesów obejmujących od ekspresji genów po transdukcję sygnałów, polaryzację komórek, przebudowę cytoszkieletu i transport błonowy. Tym samym embrion Drosophila dostarcza nie tylko kontekstu do oceny zmian kształtu komórek w odniesieniu do morfogenezy tkanek, ale oferuje również w pełni fizjologiczne środowisko do badania procesów subkomórkowych, które nadają kształt komórkom.
Opisany tutaj protokół został opracowany w celu obrazowania specyficznej zmiany kształtu komórek nazywanej cellularyzacją. Cellularyzacja jest procesem gwałtownego wzrostu błony plazmatycznej, który ostatecznie przekształca embrion syncytialny w komórkową blastodermę. Oznacza to, że w interfazie 14. cyklu mitotycznego błona plazmatyczna jednocześnie uwypukla się do wewnątrz wokół każdego z około 6000 jąder zakotwiczonych w korze, tworząc warstwę pierwotnych komórek nabłonkowych. W przeciwieństwie do wcześniejszych sugestii, cellularyzacja nie jest napędzana kurczliwością Miozyny-26, lecz wynika głównie z egzocytozy błony z zapasów wewnętrznych7. W związku z tym cellularyzacja stanowi doskonały system do badania transportu błonowego podczas zmian kształtu komórek wymagających invaginacji lub ekspansji błony plazmatycznej, takich jak cytokineza czy morfogeneza cewek poprzecznych (T-tubules) w mięśniach.
Należy zauważyć, że protokół ten można łatwo zastosować do obrazowania innych zmian kształtu komórek w embrionie muchy, co wymaga jedynie niewielkich adaptacji, takich jak zmiana stadium zbierania embrionów lub użycie „kleju do embrionów” w celu zamocowania embrionu w określonej orientacji (Tabela 1)8-19. W każdym przypadku schemat postępowania jest zasadniczo taki sam (Rysunek 1). Do przygotowania stabilnych linii much wyrażających białko zainteresowania, połączone z zielonym białkiem fluorescencyjnym (GFP) lub jego wariantami, stosuje się standardowe metody klonowania i transgenezy Drosophila; muchy te stanowią odnawialne źródło embrionów. Alternatywnie, białka fluorescencyjne/sondy wprowadza się bezpośrednio do embrionów much za pomocą prostych technik mikroiniekcji9-10. Następnie, w zależności od zdarzenia rozwojowego i zmiany kształtu komórek poddawanych obrazowaniu, embriony są zbierane i etapowane na podstawie morfologii pod mikroskopem stereoskopowym, a na koniec pozycjonowane i montowane do obrazowania time-lapse na mikroskopie konfokalnym.

Wczesny rozwój muszki owocówki, Drosophila melanogaster, charakteryzuje się szeregiem zmian kształtu komórek, które są bardzo odpowiednie dla metod obrazowania. Niniejszy artykuł opisze podstawowe narzędzia i metody niezbędne do konfokalnego obrazowania zarodków Drosophila na żywo, koncentrując się na procesie zmiany kształtu komórek zwanym cellularizacją.

Obrazowanie zmian kształtu komórek w żywych zarodkach Drosophila

Rozwijający się zarodek Drosophila melanogaster ulega liczby zmian kształtu komórek, które są w wysokim stopniu podatne na konfokalne obrazowanie żywych tkanek. Kształt komórki ...

Ogólnym celem niniejszej procedury jest obrazowanie zmian kształtu komórek w żywych embrionach drosofil (*Drosophila*). Jest to realizowane poprzez wstępne wytworzenie i namnożenie transgenicznych linii much wyrażających sondy białkowe znakowane GFP. Drugim etapem procedury jest przeniesienie tych much do kubków do zbierania embrionów.Trzecim krokiem procedury jest pobranie embrionów. Czwartym krokiem jest powlekanie i montaż embrionu. W końcowym etapie, dzięki obrazowaniu konfokalnemu w trybie time-lapse zamontowanych embrionów, można uzyskać wyniki pokazujące zmiany kształtu komórek.Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak obrazowanie utrwalonych tkanek, jest możliwość uchwycenia dynamicznych aspektów zmian kształtu komórek w kontekście żywych embrionów. Chociaż opisana tutaj metoda jest dostosowana do procesów esofagizacji, można ją zaadaptować i zastosować do innych zmian kształtu komórek towarzyszących wczesnemu rozwojowi muchy, takich jak formowanie bruzdy brzusznej, wydłużanie pasma zarodkowego, trachegeneza oraz zamknięcie grzbietowe. Osoby rozpoczynające pracę z tą techniką często napotykają trudności podczas manipulowania embrionami i ic

imaging-cell-shape-change-in-living-drosophila-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Obrazowanie zmian kształtu komórek w żyjących Drosophila zarodkach

Drosophila hemocyty rozprzestrzeniają się po całym rozwijającym się embrionie. Niniejszy protokół demonstruje sposób montowania i obrazowania tych migracji z wykorzystaniem embrionów z hemocytami znakowanymi fluorescencyjnie.

Obrazowanie na żywo migracji hemocytów embrionalnych Drosophila melanogaster

W niniejszym opracowaniu przedstawiamy protokół montowania barwionych zarodków Drosophila w pozycji pionowej, co umożliwia obrazowanie przekrojów poprzecznych z wykorzystaniem mikroskopii konfokalnej.

Obrazowanie w układzie pionowym embrionów Drosophila

Tutaj opisujemy skuteczną metodę badania dynamiki apoptotycznego oczyszczania komórek in vivo. Metoda ta wykorzystuje żywe zarodki Drosophila jako potężny model do monitorowania fagocytozy komórek apoptotycznych przy użyciu specyficznego znakowania komórek apoptotycznych i fagocytów.

Obrazowanie na żywo apoptotycznego usuwania komórek podczas embriogenezy Drosophila

Ten artykuł demonstruje użycie szybkiego skaningowego mikroskopu konfokalnego do obrazowania zachowania komórek bezpośrednio przez poczwarkę. Pozostawiając nienaruszoną obudowę poczwarki, metoda ta umożliwia obserwację i pomiar dynamicznych procesów komórkowych na etapie rozwoju Drosophila, który jest trudny do bezpośredniego zbadania.

Obrazowanie przez poczwarkę Drosophila melanogaster

Ten protokół szczegółowo opisuje uproszczoną metodę używaną do przeprowadzania obrazowania żywych komórek w kontekście nienaruszonego mózgu larwy. Metody obrazowania żywych komórek są nieocenione w badaniu asymetrycznych podziałów nerwowych komórek macierzystych, a także innych procesów neurogennych i rozwojowych, konsekwentnie odkrywając mechanizmy, które wcześniej były pomijane.

Obrazowanie na żywo neuroblastów larw Drosophila

Ten protokół przedstawia skuteczną metodę obrazowania żywego nabłonka oka poczwarki Drosophila. Metoda ta kompensuje ruch tkanek i nierówną topologię, poprawia wizualizację granic komórek dzięki zastosowaniu wielu białek połączeniowych znakowanych GFP i wykorzystuje łatwe w montażu urządzenie do obrazowania.

Obrazowanie na żywo oka poczwarki Drosophila

Tutaj opisujemy procedurę przechwytywania na żywo obrazów gastrulacji Drosophila. Umożliwiło nam to lepsze zrozumienie zwężenia wierzchołkowego związanego z wczesnym rozwojem i dalszą analizę mechanizmów rządzących ruchami komórek podczas modyfikacji struktury tkanki.

Obrazowanie zmiany kształtu komórki i ruchu komórek w gastrulacji Drosophila przy użyciu transgenicznych much reporterowych DE-kadheryny

Ten protokół opisuje szczegółową metodę długoterminowej hodowli ex vivo i obrazowania na żywo wyobrażonego dysku Drosophila. Pokazuje różnicowanie fotoreceptorów i rotację ommatidialną w ciągu 10 godzin obrazowania na żywo tarczy oka. Protokół jest prosty i nie wymaga kosztownej konfiguracji.

Długoterminowe obrazowanie na żywo dysku oka Drosophila

Ten protokół jest przeznaczony do obrazowania i analizy dynamiki orientacji komórek i wzrostu tkanek w nabłonku brzusznym Drosophila, gdy muszka owocowa przechodzi metamorfozę. Opisana tutaj metodologia może być zastosowana do badania różnych etapów rozwojowych, tkanek i struktur subkomórkowych u Drosophila lub innych organizmów modelowych.

Obrazowanie i analiza orientacji tkanek i dynamiki wzrostu w rozwijającym się nabłonku Drosophila w stadiach poczwarkowych

Tutaj udostępniamy szczegółowy protokół do wykonywania na żywo obrazowania asymetrycznego podziału komórek macierzystych linii zarodkowej (GSC) w niszy jajnikowej Drosophila. Używamy linii transgenicznej, która wszechobecnie ulega ekspresji fuzji białka zielonej fluorescencji (GFP) białka spektrosomu Par-1.

Rozszerzone obrazowanie na żywo nisz komórek macierzystych linii zarodkowej Drosophila melanogaster

Tutaj przedstawiono protokół długoterminowego obrazowania na żywo nogi Drosophila w fazie poczwarki, obejmujący całkowite usunięcie poczwarki. Protokół ten można również zastosować do innych tkanek.

Długoterminowe obrazowanie na żywo rozwoju nogi poczwarki Drosophila po usunięciu pupary

Poznaj metodę obrazowania zmian kształtu komórek w żywych zarodkach Drosophila melanogaster przy użyciu konfokalnej mikroskopii czasowo-rozdzielczej z sondami GFP. Technika ta umożliwia badanie dynamicznych procesów rozwojowych w czasie rzeczywistym.

Obrazowanie zmian kształtu komórek w żywych zarodkach Drosophila

Przeglądaj więcej filmów