Name: Zastosowanie systemu wiszącego ciężarka do niedokrwienia wątroby u myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 53 s
Description: Poznaj metodę wiszącego ciężarka do indukcji niedokrwienia wątroby u myszy. Technika ta umożliwia precyzyjną kontrolę czasu niedokrwienia bez uszkadzania tkanek wątrobowych, co ułatwia badania nad uszkodzeniami reperfuzji.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Niniejsze badania były wspierane przez granty Narodowych Instytutów Zdrowia Stanów Zjednoczonych (National Institutes of Health) R01-HL092188, R01-DK083385 i R01HL098294, granty Foundation for Anesthesia Education and Research (FAER) przyznane HKE, a także stypendium badawcze DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft) (GR2121/1-1) i grant American Heart Association przyznany AG.

Uwagi ogólne. Wszystkie czynności powinny być wykonywane pod stereomikroskopem (Leica) przy użyciu koagulatora chirurgicznego. Myszy w grupach eksperymentalnej i pozorowanej powinny być dobrane pod względem wieku i masy ciała, aby zapewnić porównywalność wyników. Temperatura, ciśnienie krwi, znieczulenie oraz podawanie płynów powinny być stabilne i monitorowane przez cały czas trwania eksperymentu.
1. Znieczulenie i operacja
<ol>
 <li>Myszy C57BL/6 powinny znajdować się w przedziale wiekowym od 10 do 16 tygodni i powinny być dopasowane pod względem płci w poszczególnych grupach.</li>
 <li>Zanurzyć myszy w anestezji za pomocą pentobarbitalu sodu (70 mg/kg masy ciała i.p.) i podtrzymać znieczulenie dawką ok. 10 mg/kg/h pentobarbitalu sodu. Przedawkowanie może znacząco obniżyć ciśnienie krwi, a tym samym zmienić wyniki.</li>
 <li>Umieścić myszy na stole grzewczym z kontrolą temperatury (RT, Effenberg, Monachium, Niemcy) z termometrem rektalnym podłączonym do regulatora sprzężenia zwrotnego w celu utrzymania temperatury ciała na poziomie 37 °C.</li>
 <li>Umieścić myszy w pozycji grzbietnej na stole operacyjnym, mocując kończyny górne i dolne do stołu za pomocą usuwalnej taśmy.</li>
 <li>W przypadku eksperymentów z przeżyciem wymagane jest stosowanie odpowiednich technik aseptycznych, w tym wygolenia sierści, dezynfekcji skóry jodoforami (np. Betadine), sterylnej obsługi autoklawowanych narzędzi oraz używania masek i sterylnych rękawiczek przez operatora.</li>
</ol>
2. Zator sieci wrotnej
<ol>
 <li>Przykryj obszar nacięcia olejem mineralnym, aby zapobiec wdychaniu włosów myszy podczas przecinania skóry, co eliminuje ryzyko wystąpienia alergii na włosy mysie. Wykonaj laparotomię pośrodkową oraz nacięcie linea alba do górnej krawędzi, aby umożliwić łatwe odsłonięcie wątroby. Jeśli to możliwe, nacięcie wykonaj za pomocą elektrody koagulacyjnej (Erbe, ICC50, Tuebingen, Niemcy), aby zapobiec krwawieniu.</li>
 <li>Ustaw stół grzewczy z myszą w taki sposób, aby ogon był skierowany w stronę chirurga. Taka pozycja zapewnia optymalne warunki do zlokalizowania triady i założenia szwu.</li>
 <li>Przesuń jelito na prawą stronę za pomocą zwilżonego patyczka bawełnianego, aby odsłonić triadę wrotną.</li>
 <li>Lekko przesuń płat środkowy i lewy w stronę przepony, a płat prawy w stronę jelita. Zapewni to wyraźny widok na triadę wrotną powyżej rozgałęzienia płatów prawego, środkowego i lewego.</li>
 <li>Uważnie obejrzyj triadę wrotną i delikatnie przytrzymaj płat prawy pęsetą anatomiczną. Umożliwi to dobry wgląd w lewą triadę wrotną.</li>
 <li>Po wizualnej identyfikacji, za pomocą igłotrzymacza, wprowadź igłę z nicią (szew nylonowy 7/0; Ethicon, Norderstedt, Niemcy) pod lewą triadę wrotną, obejmując tętnicę wątrobową, żyłę wątrobową i przewód żółciowy, od lewej do prawej strony myszy.</li>
 <li>Szew musi znajdować się bezpośrednio pod triadą. Zbyt głębokie wprowadzenie igły może uszkodzić żyłę główną dolną (vena cava inferior), która znajduje się pod triadą. Dlatego przed założeniem szwu przytrzymaj prawy płat wątroby pęsetą, aby zidentyfikować żyłę główną.</li>
 <li>Chwyć końcówkę igły po prawej stronie pęsetą i ostrożnie wyciągnij ją z obszaru wątroby, nie powodując jej uszkodzenia.</li>
 <li>Do każdego końca nici przymocuj probówkę Eppendorf (około 3 g, wypełnioną wodą) i umieść oba końce nici na uchwytach do szwów. Umieść uchwyty dystalnie od szwu, tak aby nić nie kolidowała z prawą triadą.</li>
 <li>Zastosowanie obciążników spowoduje natychmiastowe zamknięcie triady, co doprowadzi do przerwania dopływu krwi do płatów lewego i środkowego wątroby. Poprawność zamknięcia można łatwo potwierdzić poprzez wizualną ocenę bladości niedokrwionych płatów. W przeciwieństwie do tego, zmiana koloru natychmiast znika po zdjęciu obciążników i reperfuzji wątroby. Ten model częściowego niedokrwienia wątroby zapobiega zastojowi krezkowemu poprzez zachowanie przepływu krwi do prawych płatów wątroby.</li>
 <li>Wprowadź jelito z powrotem do jamy brzusznej. Utrzymuj wątrobę i jelito w cieple, używając zwilżonego tamponu nasączonego wodą o temperaturze 37.0 °C. Aby utrzymać stabilną temperaturę ciała, po zakończeniu operacji owiń myszy dostępną w handlu folią spożywczą.</li>
 <li>Wykonaj niedokrwienie zgodnie z protokołem eksperymentalnym. Po określonym czasie niedokrwienia zdejmij obciążniki, co spowoduje natychmiastowe rozpoczęcie reperfuzji płatów środkowego i lewego wątroby. Technika ta pozwala na wywołanie odwracalnego niedokrwienia u myszy. Jeśli nie są planowane kolejne okresy niedokrwienia, ostrożnie usuń szew.</li>
 <li>Podaj około 40 μl chlorku sodu do jamy brzusznej na 15 minut przed oraz bezpośrednio po reperfuzji. Kontynuuj podawanie płynów co 30 minut w ilości 10 μl, aby zrekompensować utratę płynów w czasie reperfuzji.</li>
 <li>W przypadku eksperymentów przeżywalności ranę chirurgiczną zamyka się szwem ciągłym ściany mięśniowej i skóry, używając nici 4/0.</li>
</ol>
3. Zmiany w ukrwieniu wątroby
W celu oceny uszkodzenia wątroby po niedokrwieniu wątrobowym zaleca się wyznaczenie następujących parametrów wynikowych:
Oznacz stężenie enzymów wątrobowych (np. ALT, AST) oraz przeprowadź badanie histologiczne wątroby (barwienie H&amp;E) po niedokrwieniu i reperfuzji wątroby3,9.
<img alt="Schemat niedokrwienia wątroby; porównanie płatów przed i w trakcie niedokrwienia, z uwzględnieniem zmian naczyniowych." src="/files/ftp_upload/2550/2550fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 1"> 
Rysunek 1. Model systemu z obciążeniem wiszącym do indukowania niedokrwienia wątroby: Opracowano system z obciążeniem wiszącym w celu indukowania niedokrwienia płata lewego i środkowego wątroby3(A) W związku z tym jądro oraz płat prawy zostały delikatnie oddzielone od płata lewego. Następnie płat prawy lekko przesunięto, aby uzyskać wyraźny widok na triadę wrotną powyżej rozgałęzienia na płaty prawy, środkowy i lewy. Pod triadą wątrobową lewą umieszczono szew nylonowy 8.0. (B) Na końcu każdego szwu przymocowano i zawieszono niewielki ciężarek (probówki Eppendorf 3 g wypełnione wodą). Niedokrwienie wątroby jest widoczne poprzez zmianę koloru płata lewego i środkowego z czerwonego na blady. Taki projekt eksperymentalny umożliwia precyzyjne zamknięcie i reperfuzję triady wątrobowej lewej poprzez nakładanie i zwalnianie obciążenia ciężarkiem.
<img alt="aktywność enzymów ALT i AST, czas niedokrwienia, wykres słupkowy, analiza biochemiczna, próba wątrobowa" src="/files/ftp_upload/2550/2550fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> 
Rysunek 2. Wpływ różnych czasów niedokrwienia wątroby na poziom aminotransferazy alaninowej (ALT) i asparaginianowej (AST) u myszy. Częściowe niedokrwienie trójkąta wrotnego indukowano zgodnie z opisem (niedokrwienie trwające od 0 do 60 min). Po 2 h reperfuzji zmierzono poziomy ALT (A) i AST (B). Wyniki przedstawiono jako średnie ± SE dla 6–7 myszy w grupie. *P &lt; 0,05 w porównaniu z 0 min niedokrwienia (kontrola pozorowana).

<ol><li>Rook, M., Rand, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+long-term+outcome+after+liver+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Organ.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Predictors of long-term outcome after liver transplant.</a> Curr. Opin. Organ. Transplant. 16, 499-504 (2011).</li>
<li>Henrion, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia%2Freperfusion+injury+of+the+liver%3A+pathophysiologic+hypotheses+and+potential+relevance+to+human+hypoxic+hepatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Gastroenterol.+Belg%22%5BJournal%5D)">Ischemia/reperfusion injury of the liver: pathophysiologic hypotheses and potential relevance to human hypoxic hepatitis.</a> Acta. Gastroenterol. Belg. 63, 336-347 (2000).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Kohler, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+hanging-weight+system+for+liver+ischemic+preconditioning+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Gastrointest.+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Use of a hanging-weight system for liver ischemic preconditioning in mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294, 1431-1440 (2008).</li>
<li>Schneider, M., Geyte, K., Fraisl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+or+silencing+of+the+PHD1+prolyl+hydroxylase+protects+livers+of+mice+against+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Loss or silencing of the PHD1 prolyl hydroxylase protects livers of mice against ischemia/reperfusion injury.</a> Gastroenterology. 138, 1143-1154 (2010).</li>
<li>Coriat, R., Leconte, M., Kavian, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mangafodipir+Protects+against+Hepatic+Ischemia-Reperfusion+Injury+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mangafodipir Protects against Hepatic Ischemia-Reperfusion Injury in Mice.</a> PLoS One. 6, e27005(2011).</li>
<li>Sakai, N., Van Sweringen, H. L., Schuster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Receptor+activator+of+NF-kappaB+ligand+%28RANKL%29+protects+against+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Receptor activator of NF-kappaB ligand (RANKL) protects against hepatic ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. , (2011).</li>
<li>Zhang, J., Hu, W., Xing, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Protective+Role+of+CD59+and+Pathogenic+Role+of+Complement+in+Hepatic+Ischemia+and+Reperfusion+Injury%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">The Protective Role of CD59 and Pathogenic Role of Complement in Hepatic Ischemia and Reperfusion Injury.</a> Am. J. Pathol. 179, 2876-2884 (2011).</li>
<li>Beldi, G., Banz, Y., Kroemer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+CD39+on+natural+killer+cells+attenuates+hepatic+ischemia%2Freperfusion+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Deletion of CD39 on natural killer cells attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 51, 1702-1711 (2010).</li>
<li>Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+adenosine+production+by+ecto-5%27-nucleotidase+protects+during+murine+hepatic+ischemic+preconditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning.</a> Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).</li>
<li>Beraza, N., Ludde, T., Assmus, U., Roskams, T., Vander Borght, S., Trautwein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatocyte-specific+IKK+gamma%2FNEMO+expression+determines+the+degree+of+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hepatocyte-specific IKK gamma/NEMO expression determines the degree of liver injury.</a> Gastroenterology. 132, 2504-2517 (2007).</li>
<li>Lentsch, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+and+function+of+hepatocyte+NF-kappaB+in+postischemic+liver+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Activation and function of hepatocyte NF-kappaB in postischemic liver injury.</a> Hepatology. 42, 216-218 (2005).</li>
<li>Luedde, T., Assmus, U., Wustefeld, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+IKK2+in+hepatocytes+does+not+sensitize+these+cells+to+TNF-induced+apoptosis+but+protects+from+ischemia%2Freperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of IKK2 in hepatocytes does not sensitize these cells to TNF-induced apoptosis but protects from ischemia/reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 115, 849-859 (2005).</li>
<li>Kapitsinou, P. P., Liu, Q., Unger, T. L. Hepatic HIF-2 regulates erythropoietic responses to hypoxia in renal anemia. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKapitsinou%2C+PP+%22Blood%22">Blood</a>. , (2010).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano konfliktów interesów.

Niniejsze badanie opisuje technikę wywoływania niedokrwienia w modelu mysim z wykorzystaniem systemu obciążników wiszących do okluzji lewej triady wrotnej wątroby. Choć metoda ta jest łatwa do opanowania, należy wziąć pod uwagę następujące pułapki. Bardzo częstym błędem na początku jest zbyt głęboki szew, który obejmuje triadę wrotną oraz żyłę główną dolną. Częstość oddechów i tętno zwolnią w ciągu 15 minut z powodu zwiększonego oporu i zmniejszenia powrotu krwi do serca, co doprowadzi do przedwczesnej śmierci myszy. Najlepszym sposobem na uniknięcie objęcia żyły głównej dolnej jest zlokalizowanie jej przed założeniem szwu poprzez odciągnięcie prawych płatów pęsetą. Inną istotną kwestią jest to, aby obciążniki nie były zbyt ciężkie, co mogłoby spowodować nadmierny nacisk na lewą i prawą triadę wrotną, co również zatrzyma przepływ krwi do prawych płatów. Dlatego ilość wody w probówkach Eppendorf powinna być dostosowana do masy myszy, a uchwyty do nici chirurgicznych powinny być umieszczone dystalnie od miejsca szwu. I odwrotnie, jeśli obciążniki będą zbyt lekkie, ciśnienie krwi nie zostanie całkowicie zatrzymane. Oba błędy są łatwo wykrywalne poprzez dodatkową zmianę koloru prawego płata na blady lub niewystarczającą zmianę koloru płata środkowego i lewego, odpowiednio. W związku z tym zmianę koloru wątroby po zastosowaniu obciążników należy kontrolować co 10 minut. Inną częstą komplikacją chirurgiczną jest uszkodzenie wątroby igłą. Dlatego prawe płaty powinny być odciągnięte tępą pęsetą, aby czubek igły był łatwo widoczny i mógł zostać chwycony igłotrzymaczem. Jeśli na początku uwzględni się te pułapki, system obciążników wiszących do niedokrwienia wątroby zapewnia wysoką reprodukowalność uszkodzenia niedokrwiennego poprzez minimalizację zmienności uszkodzeń wątroby związanych z zaciskaniem triady wrotnej. Dzięki zastosowaniu systemu obciążników wiszących triada wrotna jest manipulowana tylko raz podczas całej procedury chirurgicznej, co powoduje znacznie mniejsze uszkodzenia płatów wątroby. Ponadto przy tej technice nie występuje zastój w wątrobie ani w jelitach. Większe urazy tkanek występują podczas zdejmowania i ponownego zakładania zacisków naczyniowych, zwłaszcza przy ponownym aplikacji zacisku podczas wielu cykli niedokrwienia, np. podczas warunkowania niedokrwiennego. Stosowanie obciążników wiszących, które znajdują się w pewnej odległości od tkanki wątroby, według naszych obserwacji, daje korzyść w postaci niezawodnej okluzji przy jednoczesnym zapobieganiu urazom tkanek wynikającym z manipulacji płatami wątroby podczas ponownego zakładania zacisku. Podsumowując, niniejsze badanie wykazuje wykonalność systemu obciążników wiszących do okluzji triady wrotnej podczas niedokrwienia, minimalizując zmienność i ograniczenia związane z zaciskaniem. Tym samym technika ta może być interesująca dla innych badaczy rozważających badanie niedokrwienia wątroby.

<table><tbody><tr><td>Pentobarbital sodu (Fatal Plus)</td><td>Vortech Pharmaceutical Ls, Ltd</td><td>V.P.L. 9372</td><td>4 mg/mL w soli fizjologicznej</td></tr><tr><td>Szew, Prolene 8.0</td><td>Ethicon, USA</td><td>M8739</td><td>wielorazowy</td></tr><tr><td>mikroskop stereoskopowy </td><td>Leica</td><td>Brak danych</td><td>należy uwzględnić odpowiednio dużą odległość roboczą</td></tr><tr><td>Stół grzejny</td><td>Rt, Effenberger, Niemcy</td><td>Nie dotyczy</td><td>wyłączny i jedyny dostawca</td></tr><tr><td>Instrumenty chirurgiczne</td><td>WPI, Dumont</td><td></td><td>Pinceta, igłotrzymacz</td></tr><tr><td>Koagulator</td><td>Erbe, ICC50, Tuebingen, Niemcy</td><td>Nie dotyczy</td><td>Różni dostawcy koagulantów</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;Proszę podać tekst źródłowy do przetłumaczenia. Jestem gotowy do przygotowania profesjonalnego przekładu treści JoVE na język polski, zgodnie z Twoimi wytycznymi dotyczącymi rejestru akademickiego i precyzji terminologicznej.&quot;&gt;&lt;silny&gt;Tabela 1. &lt;/strong&gt; Specyficzne odczynniki i sprzęt.&lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

zastosowanie systemu z obciążnikiem wiszącym do indukowania niedokrwienia wątroby u myszy

Use of a Hanging-weight System for Liver Ischemia in Mice

Ostre uszkodzenie wątroby spowodowane niedokrwieniem może wystąpić podczas wielu procedur klinicznych, np. podczas transplantacji wątroby, resekcji guza wątroby lub naprawy urazów, i może prowadzić do niewydolności wątroby, która charakteryzuje się wysokim wskaźnikiem śmiertelności1-2. W związku z tym badania nad niedokrwieniem wątroby u myszy stały się ważną dziedziną badań, dając możliwość wykorzystania metod farmakologicznych i genetycznych3-9. W szczególności myszy warunkowe z tkankowo specyficzną delecją genu (system cre, flox) pozwalają na zgłębienie roli białek w konkretnych tkankach10-13. Ze względu na trudności techniczne związane z ręcznym zaciskaniem triad portalnych u myszy, przeprowadziliśmy systematyczną ocenę z wykorzystaniem systemu obciążników zawieszonych do okluzji triady portalnej, który został opisany wcześniej3. Stosując system obciążników zawieszonych, zakładamy szew wokół lewej gałęzi triady portalnej bez powodowania uszkodzeń płatów wątroby, ponieważ nawet najmniejsze dostępne kleszczyki mogą uszkodzić tkankę wątroby ze względu na bliskość tkanki wątrobowej względem naczyń. Ponadto prawa gałąź triady wątrobowej pozostaje przerywna, dzięki czemu przy zastosowaniu tej techniki nie dochodzi do zastoju w jelitach, ponieważ zachowany jest przepływ krwi do prawych płatów wątroby. Co więcej, triada portalna jest manipulowana tylko raz podczas całej procedury chirurgicznej. W rezultacie można łatwo przeprowadzać procedury takie jak wstępne kondycjonowanie z krótkimi okresami niedokrwienia i reperfuzji. Systematyczna ocena tego modelu poprzez zastosowanie różnych czasów niedokrwienia i reperfuzji wykazała ścisłą korelację czasu niedokrwienia wątroby z uszkodzeniem wątroby, mierzonym poziomicami aminotransferazy alaninowej (ALT) i asparaginianowej (AST) w surowicy3,9. Podsumowując, badania te potwierdzają wysoką powtarzalność uszkodzenia wątroby przy użyciu systemu obciążników zawieszonych do wywoływania niedokrwienia wątroby i przerywanej reperfuzji. Zatem technika ta może być przydatna dla innych badaczy zainteresowanych badaniami nad niedokrwieniem wątroby u myszy. W związku z tym materiał wideo przedstawia szczegółowy, krok po kroku opis tej techniki.

Opracowaliśmy nowy mysi model systemu obciążnika wiszącego do zamykania zatoki wrotnej. Technika ta może być użyteczna w przyszłych badaniach nad niedokrwieniem w mysich modelach wątroby.

Zastosowanie systemu z obciążnikiem wiszącym do indukowania niedokrwienia wątroby u myszy

Ostre uszkodzenie wątroby w wyniku niedokrwienia może wystąpić podczas kilku procedur klinicznych, np. transplantacji wątroby, resekcji guza wątroby lub naprawy po urazie i ...

Celem niniejszej procedury jest wywołanie niedokrwienia wątroby do badania uszkodzenia reperfuzyjnego. Osiąga się to najpierw poprzez odsłonięcie płatów wątroby. Kolejnym krokiem jest odsłonięcie lewej triady wrotnej, która obejmuje żyłę wrotną, tętnicę wątrobową oraz przewód żółciowy.Po izolacji, wokół lewej triady zakłada się szew, a następnie stosuje się system obciążników wiszących w celu wywołania niedokrwienia wątroby. W określonym punkcie czasowym po wystąpieniu niedokrwienia, obciążniki są podnoszone, aby rozpocząć reperfuzję. Ostatecznie stopień uszkodzenia wątroby po niedokrwieniu i reperfuzji można określić poprzez pomiar poziomu LT i ST we krwi oraz wykonanie badania histopatologicznego wątroby. Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak stosowanie zacisków do wywołania niedokrwienia wątroby, jest fakt, że szew nie powoduje uszkodzenia tkanki wątroby, a czas trwania niedokrwienia może być określony bardziej precyzyjnie.Wizualna demonstracja tej metody jest kluczowa, ponieważ precyzyjne umieszczenie szwu jest niezbędne do uzyskania powtarzalnego niedokrwienia wątroby bez uszkadzania tkanki. Rozpocznij od przygotowania pola operacyjnego ze zsterylizowanymi instrumentami oraz wszystkimi innymi materiałami wymaganymi do zabiegu. Na początek umieść znieczuczoną mysz w pozycji grzbietowej na stole grzewczym z kontrolą temperatury.Przymocuj kończyny górne i dolne do stołu za pomocą odrywalnej taśmy, aby ułatwić zlokalizowanie triady i umieszczenie szwu. Ustaw mysz oraz stół grzewczy w taki sposób, aby ogon był skierowany w stronę chirurga. Następnie wprowadź sondę rektalną podłączoną do kontrolera sprzężenia zwrotnego temperatury w celu utrzymania temperatury ciała.Przykryj obszar nacięcia olejem mineralnym, aby zapobiec wdychaniu sierści myszy i zmniejszyć ekspozycję na alergeny. Po odpowiednim przygotowaniu zwierzęcia potwierdź głębokość znieczulenia przed wykonaniem laparotomii pośrodkowej. Kontynuuj nacinanie białej linii brzusznej, aż do momentu, gdy wątroba będzie łatwo widoczna.Następnie za pomocą wilgotnego patyczka higienicznego odsuń jelita, aby odsłonić triadę wrotną. Aby uzyskać lepszą widoczność, przesuń płat środkowy i lewy w stronę przepony, a płat prawy w stronę jelit. Użyj pęsety anatomicznej, aby przytrzymać płat prawy i uzyskać wyraźny widok lewego wrotu.Triada i żyła java dolna. Ostrożnie przeprowadź szew wokół lewej triady wrotnej. Obejmuje ona tętnicę wątrobową, żyłę wątrobową i przewód żółciowy.Za pomocą pęsety chwyć końcówkę igły z prawej strony i delikatnie przeciągnij szew, nie uszkadzając wątroby. Szew powinien zostać umieszczony tuż pod triadą; głębsze wprowadzenie może spowodować uszkodzenie żyły głównej dolnej. Po umieszczeniu szwu przymocuj dociążoną rurkę eend orph do każdego z jego końców.Po przygotowaniu obciążniki te zostaną umieszczone na uchwytach do szwów, które znajdują się dystalnie względem szwu. Aby wywołać niedokrwienie, należy – jak pokazano tutaj – przesunąć oba obciążniki na uchwyty do szwów. Spowoduje to natychmiastowe zamknięcie trzydrożnego układu wrotnego, co doprowadzi do przerwania dopływu krwi do lewego i środkowego płata wątroby.Prawidłowe zamknięcie naczynia potwierdza bladość płatów środkowego i lewego wątroby. Ten model częściowego niedokrwienia wątroby pozwala uniknąć zastoju w krążeniu krezkowym dzięki zachowaniu przepływu krwi do prawych płatów wątroby. Po upływie ustalonego czasu niedokrwienia należy zdjąć obciążniki, aby znieść napięcie szwu.Wraz z reperfuzją wątroby powinna stać się widoczna zmiana jej koloru. Umieść jelita z powrotem w jamie brzusznej, a wątrobę i jelita utrzymuj w cieple, używając wilgotnego tamponu nasączonego ciepłą wodą. Po okresie reperfuzji można pobrać krew oraz tkankę wątroby, aby ocenić stopień uszkodzenia narządu po niedokrwieniu wątroby.Zakres uszkodzenia wątroby można określić poprzez barwienie tkanki hematoksyliną i eozyną. Zdrowa tkanka widoczna tutaj wykazuje mniejszą wakuolizację i obrzęk hepatocytów w porównaniu z wątrobą niedokrwioną. Enzymy wątrobowe, alaninaminotransferaza ALT i asparaginianaminotransferaza AST, są tutaj powszechnymi markerami uszkodzenia wątroby.Poziomy zarówno LT, jak i A ST wzrosły wraz z wydłużeniem czasu niedokrwienia. Jeden wzorzec. Technikę tę można przeprowadzić w ciągu 10 minut, jeśli jest ona wykonana prawidłowo.W celu udzielenia odpowiedzi na dodatkowe pytania dotyczące uszkodzenia wątroby w wyniku niedokrwienia można zastosować inne metody, takie jak prekondycjonowanie niedokrwienne.

use-of-a-hanging-weight-system-for-liver-ischemia-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Zastosowanie systemu ciężaru wiszącego do wywołania niedokrwienia wątroby u myszy

Mysi model niedokrwienia mięśnia sercowego i prekondycjonowania niedokrwiennego jest ważnym narzędziem do badania mechanizmów kardioprotekcyjnych in vivo. W niniejszej pracy przedstawiamy łatwy w zastosowaniu model in situ dla IP serca, wykorzystujący system obciążników wiszących do okluzji tętnicy wieńcowej.

Zastosowanie systemu obciążników wiszących do okluzji tętnicy wieńcowej u myszy

Precyzyjny mysi model ostrego uszkodzenia nerek (AKI) wywołanego niedokrwieniem jest ważnym narzędziem do badania ostrego uszkodzenia nerek i potencjalnego poszukiwania środków terapeutycznych do leczenia uszkodzeń nerek. System obciążników wiszących zapewnia narzędzie do natychmiastowej i niezawodnej okluzji oraz reperfuzji tętnicy nerkowej bez powodowania zastoju nerkowego.

Zastosowanie systemu obciążeń wiszących do izolowanej okluzji tętnicy nerkowej

Uraz chirurgiczny wywołuje odpowiedź zapalną. Wiadomo, że cytokiny i ligandy endogenne modulują wielkość zawału mięśnia sercowego po niedokrwieniu i reperfuzji. Przedstawiamy zmodyfikowany model niedokrwienia i reperfuzji u myszy z zamkniętą klatką piersiową, wykorzystujący obciążniki wiszące w celu zminimalizowania efektów torakotomii.

Mysi model zamkniętoklatkowy niedokrwienia i reperfuzji mięśnia sercowego

Ten film pokazuje, jak nabyć hemodynamikę układu i wątroby u myszy. Całe monitorowanie obejmuje rejestrację parametrów życiowych, ogólnoustrojowego ciśnienia krwi, centralnego ciśnienia żylnego, szybkości przepływu w tętnicy wątrobowej wspólnej i ciśnienia w żyle wrotnej, a także szybkości przepływu wrotnego u myszy.

Monitorowanie parametrów hemodynamicznych układu układowego i wątroby u myszy

Tutaj opisujemy zabieg chirurgiczny pokazujący, jak osiągnąć trwałe podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej u myszy. Model ten ma duże znaczenie dla badania patofizjologii zawału mięśnia sercowego i towarzyszących mu procesów biologicznych.

Mysi model zawału mięśnia sercowego z wykorzystaniem trwałego podwiązania lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej

Szczegółowo opisujemy klinicznie istotny model raka jelita grubego z przerzutami do wątroby (CRLM) oraz wpływ reperfuzji niedokrwienia wątroby (I/R) na wzrost guza i przerzuty. Model ten może pomóc w lepszym zrozumieniu mechanizmów leżących u podstaw indukowanego przez operację wzrostu przerzutów do wątroby.

Mysi model przerzutowych guzów wątroby w warunkach uszkodzenia reperfuzyjnego niedokrwiennego

Protokół opisuje prostą metodę resekcji nienaruszonej wątroby myszy do badań metabolicznych poprzez perfuzję żyły wrotnej.

Ex vivo Perfuzja wątrobowa przez żyłę wrotną u myszy

Dla mysich wątrob stworzono normotermiczny system perfuzji wątroby ex vivo (NEVLP). System ten wymaga doświadczenia w mikrochirurgii, ale pozwala na uzyskanie powtarzalnych wyników perfuzji. Możliwość wykorzystania wątroby myszy ułatwia badanie szlaków molekularnych w celu identyfikacji nowych dodatków perfuzatu i umożliwia przeprowadzanie eksperymentów skoncentrowanych na naprawie narządów.

Normothermiczna perfuzja płuc ex vivo w wątrobie u myszy

Wykazano, że powiązanie podziału wątroby i podwiązania żyły wrotnej w przypadku etapowej hepatektomii (ALPPS) powoduje niezwykłą regenerację wątroby po kilku tygodniach od operacji pierwszego etapu. Modele zwierzęce, które przeszły ALPPS, zostały opracowane w celu zbadania potencjalnej zdolności regeneracji wątroby i osiągnięcia korzystnych wyników klinicznych.

Mysi model skojarzonej partycji wątroby i podwiązania żyły wrotnej do etapowego zabiegu hepatektomii wspomaganego mikroskopią

Ten protokół dostarcza informacji technicznych dotyczących rekonstrukcji naczyń krwionośnych przy użyciu techniki mankietowej w ortotopowym przeszczepie wątroby u myszy.

Rekonstrukcja naczyń krwionośnych techniką mankietową w ortotopowym przeszczepie wątroby u myszy

Mysi model częściowej 2/3 (66%) hepatektomii jest dobrze opisany w literaturze, ale rzadko stosowano bardziej rozbudowane hepatektomie naśladujące zespół małego dla rozmiaru po przeszczepie wątroby. Opisujemy rozszerzoną 78% procedurę hepatektomii w modelu mysim, która powoduje około 50% śmiertelności pooperacyjnej u zdrowych myszy.

Rozszerzona 78% hepatektomia w mysim modelu chirurgicznym

Poznaj metodę wiszącego ciężarka do indukcji niedokrwienia wątroby u myszy. Technika ta umożliwia precyzyjną kontrolę czasu niedokrwienia bez uszkadzania tkanek wątrobowych, co ułatwia badania nad uszkodzeniami reperfuzji.

Zastosowanie systemu z obciążnikiem wiszącym do indukowania niedokrwienia wątroby u myszy

Przeglądaj więcej filmów