Name: Pomiar siły myszy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-06-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: Poznaj metody pomiaru siły mięśniowej u myszy, w tym test odwróconego ekranu i podnoszenia ciężarów. Te niezawodne techniki pozwalają ocenić sprawność motoryczną w badaniach nad zaburzeniami neurologicznymi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

The Wellcome Trust za zapewnienie finansowania Open Access dla Oxford University. Robert Deacon jest członkiem grupy Oxford OXION, finansowanej z grantu Wellcome Trust WT084655MA.

1. Aparatura
1.1 Odwrócony test sitowy Kondzieli
Odwrócone sito stanowi kwadrat z siatki drucianej o boku 43 cm, składający się z oczek o rozmiarze 12 mm wykonanych z drutu o średnicy 1 mm (Rycina 1). Jest ono otoczone drewnianą listwą o głębokości 4 cm (która zapobiega wspinaniu się na drugą stronę myszom, które sporadycznie podejmują takie próby) (Rycina 2).
1.2 Test obciążników
Aparatura składa się z siedmiu ciężarków. Każdy z nich tworzy kula z zaplątanego cienkiego drutu ze stali nierdzewnej, będąca „zbieraczem kamienia” stosowanym w celu zapobiegania osadzaniu się kamienia wapiennego w domowych czajnikach. Masa takiego zbieracza jest niewielka (7 g), jednak każdy z nich jest przymocowany do serii ogniw stalowego łańcucha, z których każde waży około 13 g. Liczba ogniw waha się od jednego do siedmiu. Ich masy wynoszą zatem: 20, 33, 46, 59, 72, 85 i 98 g (ryciny 3 i 4).
2. Procedura
We wszystkich testach należy przenieść myszy do pomieszczenia doświadczalnego na 5-20 min przed rozpoczęciem badania, aby upewnić się, że są one w pełni rozbudzone. Co do zasady, aby umożliwić regenerację siły mięśniowej i powrót do normalnego poziomu pobudzenia, po każdym teście motorycznym należy poddać myszy odpoczynkowi poprzez powrót do klatki domowej.
<ol>
	<li>Test odwróconego sita Kondzieli</li>
	<li>Procedura: Umieść mysz w centrum drucianego sita, uruchom stoper, obróć sito do pozycji odwróconej w ciągu 2 sec, tak aby głowa myszy była skierowana w dół. Utrzymuj sito nieruchomo na wysokości 40-50 cm nad wyściełaną powierzchnią. Zanotuj czas, w którym mysz spadnie, lub zdejmij ją, gdy upłynie kryterialny czas 60 sec. W niektórych eksperymentach przydatne mogą być dłuższe czasy kryterialne.</li>
	<li>Punktacja w teście odwróconego sita:</li>
</ol>
Upadek w czasie 1-10 s = 1 
Upadek w czasie 11-25 s = 2 
Upadek w czasie 26-60 s = 3 
Upadek po 60 s = 4
Lub, np. dla 2 min: 
Upadek między 1-10 sec = 1 
Upadek między 11-25 sec = 2 
Upadek między 26-60 sec = 3 
Upadek między 61-90 sec = 4 
Upadek po 90 sec = 5
3. Test obciążeniowy
Utrzymaj mysz za środek lub nasadę ogona i opuść ją, aby mogła chwycić pierwsze obciążenie (20 g) leżące na blacie laboratoryjnym. W momencie, gdy mysz chwyci przednimi łapami drucianą skalę kolektora, uruchom stoper i podnieś mysz tak, aby ogniwo oderwało się od blatu. Kryterium jest utrzymanie obciążenia przez 3 s. Jeśli mysz upuści ciężarek w czasie krótszym niż 3 s, zanotuj czas jego utrzymania. Pozwól myszy odpocząć przez około 10 s, a następnie powtórz próbę z tym samym obciążeniem. Jeśli mysz zawiedzie trzykrotnie, próba zostaje zakończona, a myszy przypisuje się maksymalny osiągnięty czas/obciążenie. Jeśli utrzyma ciężarek przez 3 s, sprawdź jej możliwości z następnym, cięższym obciążeniem. Jeśli podniesie je na 3 s, sprawdź następne, jeszcze cięższe obciążenie, po wcześniejszym przetestowaniu wszystkich współlokatorów z klatki z pierwszym ciężarkiem. Ponownie, mysz otrzymuje trzy szanse na utrzymanie obciążenia przez 3 s. Końcowy wynik całkowity oblicza się jako iloczyn liczby ogniw w najcięższym łańcuchu utrzymanym przez pełne 3 s, pomnożony przez czas (sec) jego utrzymania. Jeśli najcięższe obciążenie zostanie upuszczone przed upływem 3 s, oblicza się odpowiednią wartość pośrednią. Zatem mysz utrzymująca obciążenie 5 ogniw przez 3 s, ale niezdolna do podniesienia obciążenia 6 ogniw, otrzymuje wynik (5 x 3) = 15. Jeśli utrzyma obciążenie 6 ogniw przez 1 s, otrzymuje wynik (5 x 3) + (1) = 16.
Czasami myszy mogą nie być wystarczająco zmotywowane do chwycenia aparatury. Dzieje się tak zazwyczaj u starszych zwierząt. Problem ten można zminimalizować, trzymając myszy za ogon przez dłuższy czas przed przybliżeniem ich na odległość umożliwiającą chwycenie drucianej kuli.

<ol><li>Bulfield, G., Siller, W. G., Wight, P. A., Moore, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((K.J.X+chromosome-linked+muscular+dystrophy+%28mdx%29+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">K.J.X chromosome-linked muscular dystrophy (mdx) in the mouse.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81, 1189-1192 (1984).</li>
<li>Contet, C., Rawlins, J. N. P., Deacon, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+129S2%2FSvHsd+and+C57BL%2F6JOlaHsd+mice+on+a+test+battery+assessing+sensorimotor%2C+affective+and+cognitive+behaviours%3A+implications+for+the+study+of+genetically+modified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">A comparison of 129S2/SvHsd and C57BL/6JOlaHsd mice on a test battery assessing sensorimotor, affective and cognitive behaviours: implications for the study of genetically modified mice.</a> Behavioural Brain Research. 124, 33-46 (2001).</li>
<li>Deacon, R. M. J., Brook, R. C., Meyer, D., Haeckel, O., Ashcroft, F. M., Miki, T., Seino, S., Liss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+mice+lacking+the+KATP+channel+subunit+Kir6.2%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of mice lacking the KATP channel subunit Kir6.2.</a> Physiol. Behav. 87, 723-733 (2006).</li>
<li>Deacon, R. M. J., Croucher, A., Rawlins, J. N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+cytotoxic+lesion+effects+on+species-typical+behaviors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviors in mice.</a> Behav. Brain Res. 132, 203-213 (2002).</li>
<li>Rawlins, J. N. P., Morley, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+the+behavior+of+C57BL%2F6+and+C57BL%2F10+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">A comparison of the behavior of C57BL/6 and C57BL/10 mice.</a> Behav. Brain Res. 179, 239-247 (2007).</li>
<li>Guenther, K., Deacon, R. M. J., Perry, V. H., Rawlins, J. N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+behavioural+changes+in+scrapie-affected+mice+and+the+influence+of+dapsone%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early behavioural changes in scrapie-affected mice and the influence of dapsone.</a> Eur. J. Neurosci. 14, 401-409 (2001).</li>
<li>Kondziela, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eine+neue+method+zur+messung+der+muskularen+relaxation+bei+weissen+mausen%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Int.+Pharmacodyn%22%5BJournal%5D)">Eine neue method zur messung der muskularen relaxation bei weissen mausen.</a> Arch. Int. Pharmacodyn. 152, 277-284 (1964).</li>
</ol>

Nie zadeklarowano żadnych konfliktów interesów.

Nieustannie opracowywane są modele mysie dla wielu chorób dotykających ludzki układ ruchowy, dlatego niezbędne są rzetelne testy siły u myszy. Przykłady obejmują liczne postaci dystrofii mięśniowej, chorobę Parkinsona oraz chorobę Huntingtona. Testy siły znajdują zastosowanie również w modelach regeneracji nerwów po uszkodzeniach rdzenia kręgowego lub nerwów obwodowych. Wypadki przemysłowe i samochodowe wciąż powodują znaczną niepełnosprawność u ludzi, jednak obecnie wiele prac przedklinicznych bada możliwe kierunki leczenia oparte na czynnikach wzrostu nerwów.
Mięśnie nigdy nie pracują w izolacji. Są aktywowane przez mózg, lokalne lub wyższe odruchy rdzeniowe za pośrednictwem złączy nerwowo-mięśniowych i działają w ramach ograniczeń nakładanych przez inne mięśnie oraz układ szkieletowy. Zatem złożoność tego systemu sprawia, że testy siły mięśniowej in vivo u zwierząt w stanie czuwania są niezbędne do oceny ich obecnego stanu oraz efektów wszelkich potencjalnych terapii. Myszy instynktownie mocno chwytają przedmioty, przez co Mus musculus stanowi idealny model zwierzęcy do oceny zaburzeń siły mięśniowej oraz możliwych metod leczenia.

Dla osoby postronnej idea pomiaru siły u myszy może wydawać się absurdalna, a nawet być czymś w rodzaju oksymoronu. Nie bez powodu jednak myszy domowe/laboratoryjne nazwano Mus musculus. Posiadają one w rzeczywistości bardzo wysoki stosunek siły do masy ciała, większy niż szczury. Na przykład dorosłe myszy potrafią z łatwością utrzymać ciężar własnego ciała, używając nawet tylko przednich lub tylnych łap; bardzo niewiele dorosłych szczurów laboratoryjnych jest w stanie to zrobić.
Myszy odgrywają coraz większą rolę w badaniach biomedycznych. Mogą być one wykorzystywane do modelowania wielu ludzkich zaburzeń motorycznych, zarówno tych o pochodzeniu somatycznym, jak i ośrodkowym. Do pierwszej grupy należy ponad trzydzieści postaci dziedzicznej dystrofii mięśniowej1 oraz miastenia gravis, natomiast przykładami drugiej grupy są stwardnienie rozsiane, rdzeniowy zanik mięśni, choroba Parkinsona, choroba Huntingtona oraz stwardnienie zanikowe boczne. W przypadku wszystkich tych modeli pełna ocena deficytów motorycznych musi obejmować specyficzne testy siły.

pomiar siły myszy

Measuring the Strength of Mice

Kondziela7 opracował test odwróconego sita i opublikował go w 1964 roku. Jest to test siły mięśni z wykorzystaniem wszystkich czterech kończyn. Większość zdrowych myszy bez trudu osiąga maksymalny wynik w tym zadaniu; jest to szybki, ale mało czuły test przesiewowy, a test obciążeniowy opisany w niniejszym artykule zapewni dokładniejszy pomiar siły mięśniowej.
Dostępnych jest również na rynku kilka urządzeń opartych na tensometrach, które dostarczają bardziej stopniowanych danych niż test odwróconego sita, jednak ich koszt może sprawić, że będą one poza zasięgiem wielu laboratoriów, które nie specjalizują się w badaniach wytrzymałościowych. W związku z tym w 2000 roku autor opracował tanie i proste urządzenie. Składa się ono z serii ogniw łańcucha o zwiększającej się długości, przymocowanych do „kolektora futra” – kulki z drobnej drucianej siatki, sprzedawanej w celu zapobiegania osadzaniu się kamienia w obszarach z twardą wodą. Przypadkowa obserwacja wykazała, że myszy potrafią bardzo mocno chwytać te elementy, dzięki czemu okazały się one idealnym punktem uchwytu dla urządzenia do podnoszenia ciężarów. Powszechną wadą komercyjnych mierników siły jest to, że pręt lub inny element chwytny nie jest wystarczająco cienki, aby myszy mogły wywrzeć maksymalny uścisk. Co do zasady, im cieńszy drut lub pręt, tym lepiej mysz może chwytać go swoimi małymi pazurami.
Jest to czysty test siły, choć jak w przypadku każdego testu, czynniki motywacyjne mogą odgrywać pewną rolę. Stosowanie kolektorów wagowych wydaje się jednak minimalizować problemy z motywacją, ponieważ u większości zdrowych młodych myszy dorosłych motywacja wydaje się być bardzo wysoka.

Oczekiwane wyniki
Contet et al.2 wykazali, że myszy 129S2/sv uzyskały w teście obciążeń wyniki podobne do myszy C57BL/6. Samice myszy C57BL/6 uzyskały wynik około 15, a myszy 129 wynik 17, co oznacza, że były w stanie podnieść około 5 ogniw łańcucha, czyli około 70 g. Jest to wartość wysoka; zazwyczaj myszy C57BL/6 podnoszą 2-3 ogniwa łańcucha (wynik 6-9, 33-46 g)5. Różnice te wynikają prawdopodobnie z czynników takich jak stopień oswojenia myszy oraz szczegóły techniki zastosowanej przez eksperymentatora.
Zmiany w hipokampie nie wpłynęły na siłę mierzoną za pomocą testu z obciążeniem lub testu odwróconego sita4. Myszy z chorobą prionową (scrapie) wykazywały upośledzenie w teście odwróconego sita w 18. tygodniu po zakażeniu6. Mimo pewnego upośledzenia w testach na poprzeczce poziomej i rotarodzie w stosunku do myszy C57BL/6, myszy C57BL/10 nie wykazywały upośledzenia w teście podnoszenia ciężarów5. Myszy z nokautem podjednostki kanału KATP Kir6.2 nie były upośledzone w testach odwróconego sita ani podnoszenia ciężarów, choć samice uzyskały w tym ostatnim wyższe wyniki niż samce3. Było to nietypowe, ponieważ zazwyczaj cięższe samce wykazują większą siłę niż samice.
<img alt="Równowaga statyczna, siatka druciana, układ do eksperymentu nad zachowaniem zwierząt, badanie nawigacji przestrzennej." src="/files/ftp_upload/2610/2610fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 1"> 
 Rysunek 1. Odwrócony ekran.
<img alt="Obserwacja zachowania gryzoni w środowisku klatkowym; badanie na zwierzętach, konfiguracja badań behawioralnych." src="/files/ftp_upload/2610/2610fig2.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rysunek 2"> 
 Rysunek 2. Zbliżenie myszy na odwróconym ekranie.
<img alt="Eksperyment korozyjny analizujący rdzewienie łańcuchów metalowych w czasie, prezentujący efekty utleniania." src="/files/ftp_upload/2610/2610fig3.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 3"> 
 Rycina 3. Obciążniki o masach od 20 g do 98 g.
<img alt="Eksperyment pomiaru siły chwytu u myszy; badanie funkcji mięśni z wykorzystaniem aparatu drutowego; badanie behawioralne." src="/files/ftp_upload/2610/2610fig4.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="Rycina 4"> 
 Rycina 4. Podnoszenie ciężarów przez mysz.

Deficyty siły mięśniowej występują w wielu stanach klinicznych, takich jak choroba neuronu ruchowego. Opisane tutaj testy odwróconego sita oraz podnoszenia ciężarów mierzą siłę u myszy niemal wyłącznie, przy minimalnym wpływie czynników takich jak koordynacja.

Pomiar siły myszy

Kondziela7 opracował test odwróconego sita i opublikował go w 1964 roku. Jest to test siły mięśniowej z wykorzystaniem wszystkich czterech kończyn. Większość zdrowych myszy bez trudu uzyskuje wynik...

Celem niniejszej procedury jest pomiar siły u myszy z wykorzystaniem dwóch różnych testów. W pierwszym teście mysz zostaje umieszczona na zielonej siatce drucianej, która następnie jest odwracana, a czas do upadku zostaje zarejestrowany. W drugim teście mysz chwyta piłkę z siatki drucianej przymocowaną do ogniwa stalowego łańcucha.Dodawane są kolejne ogniwa łańcucha, a całkowita waga, jaką zwierzę jest w stanie utrzymać, zostaje zapisana. W rezultacie można uzyskać wyniki ujawniające różnice w sile między myszami. Metoda ta może być użyteczna podczas badania zaburzeń motorycznych u ludzi.Ponieważ pełna ocena deficytów motorycznych musi obejmować specyficzne testy siły. Na początek należy wprowadzić zwierzęta doświadczalne do pomieszczenia od pięciu do 20 minut przed testem w celu habituacji. Odwrócony ekran to kwadrat z siatki drucianej o boku 43 centymetrów, składający się z oczek o wymiarach 12 milimetrów wykonanych z drutu o średnicy jednego milimetra.Jest ona otoczona drewnianą obramowaniem o szerokości czterech centymetrów, która zapobiega wspinaniu się myszy na drugą stronę. Aby zapobiec zranieniu myszy, pod siatką należy umieścić coś miękkiego. Po habituacji umieść mysz na środku drucianej siatki.Uruchom stoper i w ciągu dwóch sekund obróć ekran do pozycji odwróconej. Gdy głowa myszy będzie skierowana w dół, najpierw utrzymaj ekran stabilnie na wysokości 40 do 50 centymetrów nad amortyzowaną powierzchnią. Odnotuj czas, w którym mysz spadnie lub zostanie usunięta.Po osiągnięciu czasu kryterialnego wynoszącego 60 sekund. W celu oceny sprawności na odwróconym ekranie, wartości numerycznej przypisuje się czasowi, po którym zwierzę spadnie. Na przykład, upadek w przedziale od 1 do 10 sekund otrzymuje ocenę jeden, natomiast upadek między 26 a 60 sekundami.W przypadku uzyskania wyniku trzech, należy zwrócić zwierzę do klatki domowej. Po przeprowadzeniu testu kilka lat temu jeden z moich studentów zauważył, że mysz wygląda dość niechlujnie, więc uznałem, że powinienem ją nieco odświeżyć, ale nie mogłem znaleźć szczotki. Znalazłem jednak kulkę z drutu ze stali nierdzewnej, która służy do usuwania kamienia z domowych czajników.Kiedy przeczesywałam ją tą kulką z drutu, chwyciła ją i zaciekle trzymała, co sprawiło, że pomyślałam: ach, tutaj musi zachodzić próba siły. Przed zastosowaniem testu z obciążnikami w celu pomiaru siły u myszy, należy upewnić się, że zwierzęta doświadczalne zaadaptowały się do środowiska testowego, aby skonstruować obciążnik. Należy zacząć od kulki z cienkiego drutu ze stali nierdzewnej o wadze około 7 g; idealne będą zbieracze kłaczków do domowych odkurzaczy.Kuleczkę z cienkiego drutu mocuje się następnie do serii stalowych ogniw łańcucha, z których każde waży około 13 gramów. W tym przykładzie dołączono do siedmiu ogniw, tak aby uzyskać całkowite ciężary wynoszące 20, 33, 46, 59, 72, 85 i 98 gramów. Badanie należy rozpocząć od umieszczenia pierwszego obciążnika na blacie laboratoryjnym.Następnie złap mysz u nasady ogona i opuść ją, aż chwyci siatkę drucianą. Gdy mysz chwyci siatkę przednimi łapami, uruchom stoper i podnieś mysz, aż łącznik znajdzie się nad blatem stołu laboratoryjnego.Mysz musi utrzymać ciężar przez trzy sekundy. W przypadku sukcesu należy zwrócić zwierzę do jego klatki macierzystej i przetestować je z kolejnym, większym ciężarem. Następnie należy przetestować pozostałe zwierzęta.W pierwszym teście obciążenia należy używać wyłącznie czterech przednich łap do chwytania drucianej kulki. Jeśli mysz chwyci ją również tylnymi łapami, należy po prostu przerwać test, odłożyć mysz oraz obciążenie i spróbować ponownie po kilku sekundach.Jeśli mysz nie chwyta przedmiotu w odpowiedni sposób, może to wynikać z braku motywacji; można ją zwiększyć poprzez podniesienie poziomu pobudzenia, trzymając mysz za ogon nieco dłużej przed wprowadzeniem jej w kontakt z obciążeniem. Jeśli mysz upuści obciążenie przed upływem trzech sekund, należy zapisać czas, w którym nastąpiło upuszczenie. Pozostawić mysz do odpoczynku na około 10 sekund, a następnie powtórzyć test z tym samym obciążeniem.Test zakończony. Gdy zwierzę po raz trzeci nie utrzyma obciążenia, należy przenieść je z powrotem do klatki domowej i zapisać największy ciężar, który zwierzę było w stanie utrzymać przez trzy sekundy. Wynik całkowity oblicza się jako iloczyn liczby ogniw w najcięższym łańcuchu utrzymanym przez pełne trzy sekundy i czasu jego utrzymania.Na przykład, jeśli mysz utrzyma ciężarek o długości pięciu ogniw przez trzy sekundy, ale nie jest w stanie podnieść ciężarka o długości sześciu ogniw, przypisuje się jej wynik pięć razy trzy, co daje 15. Jeśli najcięższy ciężarek zostanie upuszczony przed upływem trzech sekund, można obliczyć odpowiednią wartość pośrednią. Jeśli ciężarek o długości sześciu ogniw zostanie utrzymany tylko przez jedną sekundę, można przypisać wynik pięć razy trzy plus jeden, co daje 16.Większość ludzi uważa myszy za mizerne, małe stworzenia, ale w rzeczywistości stosunek ich siły do masy ciała, biorąc pod uwagę niewielki rozmiar, jest niezwykle wysoki, a ich łacińska nazwa mu musculus jest w pełni uzasadniona. Myszy instynktownie chwytają materiały bardzo mocnym uściskiem. W związku z tym mu musculus jest idealnym zwierzęciem modelowym do oceny zaburzeń siły mięśniowej i może być wykorzystywany do testowania potencjalnych metod leczenia tych zaburzeń.

Research

JoVE Journal

Medicine

Medycyna

Przedstawiono protokoły dla dwóch uznanych zadań koordynacji ruchowej: rotarod z przyspieszeniem oraz poprzecznej belki, a także dwóch testów opracowanych niedawno w Oxfordzie: prętów statycznych i równoległych drążków. Testy te pozwalają wykryć zaburzenia motoryczne, które mogą być istotne same w sobie, a także mogą stanowić zmienne w badaniach nad innymi obszarami zachowania.

Pomiar koordynacji ruchowej u myszy

Elektroniczne pomiary von Freya są skuteczną i ulepszoną alternatywą dla klasycznych filamentów von Freya, ponieważ pozwalają na szybki i precyzyjny pomiar zmian w progach mechanicznego wycofywania gryzoni do stale stosowanych bodźców ciśnieniowych przed i po zdarzeniu zapalnym.

Pomiar zmian wrażliwości dotykowej w tylnej łapie myszy za pomocą elektronicznego aparatu von Freya

Podstawową miarą wyników w badaniach klinicznych dotyczących zaburzeń nerwowo-mięśniowych jest ogólna poprawa funkcji mięśni. Dlatego ocena wpływu potencjalnych związków terapeutycznych na wydajność mięśni przed klinicznym badaniem w modelach mysich ma ogromne znaczenie. Poniżej opisujemy kilka testów funkcjonalnych, aby rozwiązać ten problem.

Ocena wydajności funkcjonalnej w modelu myszy Mdx

Mierzymy obwodowo-płciową wrażliwość mechaniczną i aktywację komórek tucznych u samców myszy C57BL/6, które przeszły paradygmat stresu we wczesnym okresie życia - separację noworodków od matek, w celu wywołania przedklinicznego modelu przewlekłego zapalenia gruczołu krokowego/przewlekłego bólu miednicy.

Ocena wrażliwości okołopłciowej i aktywacji komórek tucznych gruczołu krokowego w mysim modelu separacji noworodków od matek

Przedstawiono podejście genetyki odwrotnej do zrozumienia rodzin genów związanych z chorobami ludzkimi, używając myszy jako systemu modelowego, a następnie opisano harmonogram fenotypowania myszy. Ponieważ myszy z wadami genu HtrA2 wykazywały objawy parkinsonowskie, schemat fenotypowania koncentruje się na identyfikacji wad neurologicznych.

Schemat fenotypowania dla genetycznie zmodyfikowanych myszy używany do badania genów związanych z chorobami człowieka związanymi ze starzeniem się

Testy behawioralne są używane w badaniach przedklinicznych do oceny fenotypowych skutków choroby lub leczenia na samopoczucie zwierzęcia. Aby globalnie ocenić funkcjonowanie motoryczne, wybraliśmy testy ogólnej lokomocji, siły mięśniowej i koordynacji: odpowiednio test otwartego pola, test siatki i test rotarod.

Bateria testów behawioralnych oceniających ogólną lokomocję, siłę mięśni i koordynację u myszy

Przeprowadziliśmy jednostronne zamknięcie tętnicy szyjnej w 7-10 dniu po urodzeniu mysich szczeniąt CD-1, aby stworzyć model niedotlenienia niedotlenienia (HI) noworodka i zbadaliśmy skutki uszkodzenia mózgu HI. Badaliśmy funkcje neurobehawioralne u tych myszy w porównaniu z normalnymi myszami, które nie były operowane.

Oceny neurobehawioralne w mysim modelu niedotlenionego i niedokrwiennego uszkodzenia mózgu u noworodków

Opracowaliśmy protokół oceny samopoczucia myszy podczas zabiegów z użyciem znieczulenia ogólnego. Przeanalizowano szereg parametrów behawioralnych wskazujących na poziom dobrostanu, a także metabolity glikokortykosteroidów. Protokół może służyć jako ogólna pomoc w oszacowaniu stopnia ciężkości w sposób naukowy, skoncentrowany na zwierzętach.

Systematyczna ocena dobrostanu myszy przed zabiegami ze względu na znieczulenie ogólne

Oswajanie u zwierząt obejmuje zmniejszenie reakcji unikania wobec ludzi (pasywne oswajanie) i wzrost aktywnych podejść do ludzi (aktywne oswajanie). W tym miejscu opisujemy szczegółowe protokoły dla trzech testów behawioralnych (aktywne oswojenie, pasywne oswojenie i testy pozostania przy ręce), aby oddzielnie zmierzyć aktywną i pasywną oswajalność myszy.

Pomiar aktywnego i pasywnego oswajania oddzielnie u myszy

Kwantyfikacja maksymalnej siły prostownika kolana jest niezbędna do zrozumienia funkcjonalnych adaptacji do starzenia się, chorób, urazów i rehabilitacji. Przedstawiamy nowatorską metodę wielokrotnego pomiaru in vivo izometrycznego szczytowego momentu obrotowego tężcowego wyprostu kolana.

Pomiar in vivo funkcji mięśni prostowników stawu kolanowego u myszy

Obecny protokół opisuje trening i testowanie oporu za pomocą statycznych i dynamicznych drabin w modelach zwierzęcych.

Wszechstronność protokołów treningu oporowego i oceny z wykorzystaniem drabin statycznych i dynamicznych w modelach zwierzęcych

Poznaj metody pomiaru siły mięśniowej u myszy, w tym test odwróconego ekranu i podnoszenia ciężarów. Te niezawodne techniki pozwalają ocenić sprawność motoryczną w badaniach nad zaburzeniami neurologicznymi.

Pomiar siły myszy

Przeglądaj więcej filmów